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[交流]
板子上长出菌落，但是菌落PCR没有得到目的片段 已有5人参与
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我要在PCS2+上连接nrf2a和gfp目的基因，其中nrf2a已经连接上，现在要连接gfp，设计了两个酶切位点，not1和sac2，可是这两个酶切位点很相近。 现在nrf2a连接上了，要连接gfp了，用takara的T4连接酶22度连接了2小时，涂氨苄板子，放于37度培养了14h左右，长出了菌落，但是菌落都是呈现那种半透明的样子。用引物PCS2+-F和M13-R扩增，只有1761左右的nrf2a大小，gfp并没有连接上。到底什么原因？求助连接体系怎么确定啊？  浓度.jpg  链接公式.jpg  链接体系.jpg  板子.jpg  PCR程序.jpg  nrf2a-gfp-pcs2+ pcr.jpg |
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