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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA电泳条带分析
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renyi2015

新虫 (小有名气)

[求助] RNA电泳条带分析 已有4人参与

求帮忙分析RNA提取的怎么样？可以做后续实时定量吗？(半定量)

RNA电泳条带分析


RNA电泳条带分析-1


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1楼 2016-01-10 00:48:20
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jinghun2004

铜虫 (小有名气)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-01-12 20:44:57
质量还算可以，左起第一个上样量太多了，电泳检测小孔胶上样量控制在80ng左右效果好！
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7楼2016-01-11 09:38:54
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俊锋

新虫 (初入文坛)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-01-12 20:45:03
质量还可以，左边第一条带有点降解了，其他的18s与28s都不错，质量好，浓度低点，就暗点。看定量pcr
用到多少浓度，可以测0D260与0D280
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8楼2016-01-11 10:07:44
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偶尔哼哼的猪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by renyi2015 at 2016-01-12 00:49:38
你好，我反转录完直接跑胶检测为什么木有条带呢？要是降解的话，反转录会不会有条带呀？降解的话测OD结果会有什么变化呢？
...

反转录完了不可以通过跑胶来检测是否反转成功。因为直接反转的样品跑胶是没有清晰单一的条带的，是一片弥散状。通常可以设计扩增管家基因的引物（比如Actin）跑个PCR就好了。出来目的条带就说明反转成功了。

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20楼2016-01-12 15:14:19
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果树研究生

新虫 (小有名气)
挺好的啊

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2楼2016-01-10 07:44:54
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冰城＇若雪

新虫 (初入文坛)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-01-12 20:45:17
1和3号有一定的降解，其他的都挺好的

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3楼2016-01-10 10:59:08
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renyi2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 果树研究生 at 2016-01-10 07:44:54
挺好的啊

为什么有的颜色那么淡，有的深呢？因为后边有做实时定量，不知道这样的RNA质量可以不

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4楼2016-01-10 15:39:28
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renyi2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 冰城＇若雪 at 2016-01-10 10:59:08
1和3号有一定的降解，其他的都挺好的

今天重新跑了一次，3是因为昨天的胶不好，1貌似降解了，因为后面要做实时定量，这样的RNA质量可以吗？为什么跑的条带有的那么淡?
RNA电泳条带分析-2



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5楼2016-01-10 15:40:46
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renyi2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 冰城＇若雪 at 2016-01-10 10:59:08
1和3号有一定的降解，其他的都挺好的

不是说28s亮度应该是下面的两倍，我怎么感觉两个条带一样亮呢？

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6楼2016-01-10 15:42:09
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zjw0919

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
5楼: Originally posted by renyi2015 at 2016-01-10 15:40:46
今天重新跑了一次，3是因为昨天的胶不好，1貌似降解了，因为后面要做实时定量，这样的RNA质量可以吗？为什么跑的条带有的那么淡?

...

第一个有样品有降解，亮度亮与不亮是浓度的不同，你可以用2000测下浓度，一些浓度过高跑胶出来不好看，比较好的浓度是500,600ng/ul。
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9楼2016-01-11 21:48:40
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穆远life

木虫 (正式写手)
楼主用的什么方法提的RNA?

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10楼2016-01-11 23:28:42
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