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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA电泳条带分析
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renyi2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 穆远life at 2016-01-11 23:28:42
楼主用的什么方法提的RNA?

比较笨的方法，天根的试剂盒，哈哈

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11楼2016-01-12 00:44:08
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renyi2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zjw0919 at 2016-01-11 21:48:40
第一个有样品有降解，亮度亮与不亮是浓度的不同，你可以用2000测下浓度，一些浓度过高跑胶出来不好看，比较好的浓度是500,600ng/ul。...

你说的2000是什么仪器呀？嘿嘿，小白，不要介意

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12楼2016-01-12 00:45:09
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偶尔哼哼的猪

新虫 (小有名气)
最后一幅图点样孔好亮 值得注意额～如果不是拍摄问题 考虑有蛋白污染
前两副图来看，如大家所说左起1，3有些降解。可以再去测280 260 230。条带亮度不同是所提RNA浓度不同造成的，毕竟不能保证每个样提出的RNA浓度一致，明暗不一样很正常。至于具体可不可以用，反转录试试就知道啦

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13楼2016-01-12 00:46:53
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renyi2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jinghun2004 at 2016-01-11 09:38:54
质量还算可以，左起第一个上样量太多了，电泳检测小孔胶上样量控制在80ng左右效果好！

怎么知道他是80ng呢？第一个我是不是应该稀释一下再上样?稀释多少倍呀？

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14楼2016-01-12 00:47:54
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renyi2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 偶尔哼哼的猪 at 2016-01-12 00:46:53
最后一幅图点样孔好亮 值得注意额～如果不是拍摄问题 考虑有蛋白污染
前两副图来看，如大家所说左起1，3有些降解。可以再去测280 260 230。条带亮度不同是所提RNA浓度不同造成的，毕竟不能保证每个样提出的RNA浓度一 ...

你好，我反转录完直接跑胶检测为什么木有条带呢？要是降解的话，反转录会不会有条带呀？降解的话测OD结果会有什么变化呢？

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15楼2016-01-12 00:49:38
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穆远life

木虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by renyi2015 at 2016-01-12 00:44:08
比较笨的方法，天根的试剂盒，哈哈
...

原来如此!

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16楼2016-01-12 09:05:24
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yzq6098273

金虫 (小有名气)
没有抹带的可以，是用盒子提的吧。

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天外飞仙
17楼2016-01-12 09:07:02
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yzq6098273

金虫 (小有名气)
盒子会把小RNA去掉。

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天外飞仙
18楼2016-01-12 09:07:42
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jinghun2004

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by renyi2015 at 2016-01-12 00:47:54
怎么知道他是80ng呢？第一个我是不是应该稀释一下再上样?稀释多少倍呀？
...

用Nanodrop(紫外分光光度计)定量，看260、230和260、280的比值，可以初步看出RNA质量如何。第一个样品上三分之二的量就足矣。

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19楼2016-01-12 13:35:47
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偶尔哼哼的猪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by renyi2015 at 2016-01-12 00:49:38
你好，我反转录完直接跑胶检测为什么木有条带呢？要是降解的话，反转录会不会有条带呀？降解的话测OD结果会有什么变化呢？
...

反转录完了不可以通过跑胶来检测是否反转成功。因为直接反转的样品跑胶是没有清晰单一的条带的，是一片弥散状。通常可以设计扩增管家基因的引物（比如Actin）跑个PCR就好了。出来目的条带就说明反转成功了。

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20楼2016-01-12 15:14:19
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