24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 4974  |  回复: 17

tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

[求助] 质粒单酶切,通过电泳能否知道酶切是否充分 已有3人参与

我用EcoRV酶切pCDNA3.1/V5-HisB,我想知道酶切的是否充分,还请各位大神不吝赐教,谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
4楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-29 21:24:32
做一个转化,线性质粒一般转不进细菌里,若正常转化一个转化子都没有,则酶切基本完全。...

“线性质粒一般转不进细菌里”,你这个说法不对,线性质粒照样可以转进细菌感受态细胞,如果单酶切后没有进行去磷酸化处理,细菌会将其修复,从而质粒可以在细菌细胞内复制,如果进行了去磷酸化处理,线性DNA不能被修复成环状,从而不能复制
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
11楼2015-12-31 10:56:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
8楼: Originally posted by szlylk0105 at 2015-12-31 10:26:32
质粒有3种存在形态,环形、半环、线形。而这三种形态的质粒在琼脂糖凝胶电泳中的运动速度不一样,为环形>半环>线形。所以线性化后的质粒要比之前跑的慢,也就是分子量大。

“所以线性化后的质粒要比之前跑的慢,也就是分子量大”,这句话不对,无论是你说的环形,半环,线形质粒DNA(你这里的术语也不专业),它们的分子量是一样大,因为碱基数还是一样,不同的是cccDNA, ocDNA, linear DNA它们的空间构象不一样,所以共价闭合环状DNA的泳动速度大于线性DNA大于开环DNA,开环DNA跑得最慢
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
9楼2015-12-31 10:52:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
tianyufeiyu: 金币+3 2016-01-14 16:22:04
tianyufeiyu: 金币+2 2016-01-14 16:24:55
线性质粒一般要比超螺旋质粒跑得慢,如果酶切后电泳只有一条带就应该是酶切充分了,跑得时间要长一点,最好加个未酶切的作对照。
生物科学
2楼2015-12-28 19:27:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-28 19:27:59
线性质粒一般要比超螺旋质粒跑得慢,如果酶切后电泳只有一条带就应该是酶切充分了,跑得时间要长一点,最好加个未酶切的作对照。

也就是说电泳是可以看到酶切的效果,请问你还知不知道有其他的方法
3楼2015-12-29 11:06:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by tianyufeiyu at 2015-12-29 11:06:00
也就是说电泳是可以看到酶切的效果,请问你还知不知道有其他的方法...

做一个转化,线性质粒一般转不进细菌里,若正常转化一个转化子都没有,则酶切基本完全。
生物科学
4楼2015-12-29 21:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-28 19:27:59
线性质粒一般要比超螺旋质粒跑得慢,如果酶切后电泳只有一条带就应该是酶切充分了,跑得时间要长一点,最好加个未酶切的作对照。

谢谢
5楼2015-12-30 11:22:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-29 21:24:32
做一个转化,线性质粒一般转不进细菌里,若正常转化一个转化子都没有,则酶切基本完全。...

这是我的酶切后的电泳图,第1个孔是没酶切的质粒,2-4孔是酶切后的,请你帮我分析下,酶切的怎么样
质粒单酶切,通过电泳能否知道酶切是否充分
]EX5{3QW~YV1Y7VZ`IPUTLF.png

6楼2015-12-30 11:26:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by tianyufeiyu at 2015-12-30 11:26:11
这是我的酶切后的电泳图,第1个孔是没酶切的质粒,2-4孔是酶切后的,请你帮我分析下,酶切的怎么样

]EX5{3QW~YV1Y7VZ`IPUTLF.png
...

应该没问题了
生物科学
7楼2015-12-30 16:03:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

szlylk0105

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒有3种存在形态,环形、半环、线形。而这三种形态的质粒在琼脂糖凝胶电泳中的运动速度不一样,为环形>半环>线形。所以线性化后的质粒要比之前跑的慢,也就是分子量大。
8楼2015-12-31 10:26:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-30 16:03:03
应该没问题了...

谢谢
10楼2015-12-31 10:55:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tianyufeiyu 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 324求调剂 +4 想上学求调 2026-04-03 4/200 2026-04-03 14:41 by rongligao
[考研] 285求调剂 +6 FZAC123 2026-03-30 6/300 2026-04-03 12:22 by xingguangj
[考研] 316求调剂 +14 舟自梗 2026-04-01 18/900 2026-04-03 10:28 by linyelide
[考研] 生物学求调剂 +3 15064154688 2026-04-03 3/150 2026-04-03 10:28 by macy2011
[考研] 材料考研调剂 +10 Gs大王 2026-04-02 10/500 2026-04-03 09:47 by 遗忘消失的灆
[考研] 一志愿a区211,085601-307分求调剂 +13 党嘉豪 2026-03-31 26/1300 2026-04-03 08:33 by 495374996
[考研] 085601一志愿北理325分求调剂 +4 找调剂,, 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:29 by dongzh2009
[考研] 070305高分子化学与物理 304分求调剂 +16 c297914 2026-03-28 16/800 2026-04-02 20:50 by dongzh2009
[考研] 293求调剂 +4 珂珂乐 2026-04-02 4/200 2026-04-02 20:10 by 6781022
[考研] 一志愿华南师范大学-22408计算机-292分-求华南师范大学调剂 +4 爱读书的小鳄鱼 2026-04-02 4/200 2026-04-02 18:35 by 求调剂zz
[考研] 环境工程297分求调剂一志愿杭高院 +15 GENJIOW 2026-03-31 16/800 2026-04-02 17:56 by cyh—315
[考研] 301求调剂 +14 骆驼男人 2026-04-02 14/700 2026-04-02 14:08 by baoball
[考研] 0817化工学硕调剂 +11 努力上岸中! 2026-03-31 11/550 2026-04-01 20:30 by 赖春艳
[考研] 生物学296求调剂 +10 汤圆包 2026-03-29 14/700 2026-04-01 10:44 by 求调剂zz
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +5 双马尾痞老板2 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:04 by oooqiao
[考研] 考研生物与医药调剂 +7 铁憨憨123425 2026-03-31 7/350 2026-04-01 08:45 by JourneyLucky
[考研] 346求调剂 一志愿070303有机化学 +11 萝卜炖青菜 2026-03-28 12/600 2026-03-31 17:54 by xhai2011
[考研] 求调剂 +8 11ggg 2026-03-30 8/400 2026-03-31 13:56 by nanaliuyun
[考研] 一志愿浙江大学工科动力工程370,数一121,专业课135,现在能去哪里 +3 080700调剂 2026-03-30 4/200 2026-03-31 12:00 by KLMY666
[考研] 数一英一271专硕(085401)求调剂,可跨 +7 前行必有光 2026-03-28 8/400 2026-03-28 23:22 by 小木虫tim
信息提示
请填处理意见