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tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

[求助] 质粒单酶切，通过电泳能否知道酶切是否充分 已有3人参与

我用EcoRV酶切pCDNA3.1/V5-HisB,我想知道酶切的是否充分，还请各位大神不吝赐教，谢谢啦
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1楼 2015-12-28 16:57:53
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
8楼: Originally posted by szlylk0105 at 2015-12-31 10:26:32
质粒有3种存在形态，环形、半环、线形。而这三种形态的质粒在琼脂糖凝胶电泳中的运动速度不一样，为环形>半环>线形。所以线性化后的质粒要比之前跑的慢，也就是分子量大。

“所以线性化后的质粒要比之前跑的慢，也就是分子量大”，这句话不对，无论是你说的环形，半环，线形质粒DNA（你这里的术语也不专业），它们的分子量是一样大，因为碱基数还是一样，不同的是cccDNA, ocDNA, linear DNA它们的空间构象不一样，所以共价闭合环状DNA的泳动速度大于线性DNA大于开环DNA，开环DNA跑得最慢
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
9楼2015-12-31 10:52:36
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科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tianyufeiyu: 金币+3 2016-01-14 16:22:04
tianyufeiyu: 金币+2 2016-01-14 16:24:55
线性质粒一般要比超螺旋质粒跑得慢，如果酶切后电泳只有一条带就应该是酶切充分了，跑得时间要长一点，最好加个未酶切的作对照。
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生物科学
2楼2015-12-28 19:27:59
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tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-28 19:27:59
线性质粒一般要比超螺旋质粒跑得慢，如果酶切后电泳只有一条带就应该是酶切充分了，跑得时间要长一点，最好加个未酶切的作对照。

也就是说电泳是可以看到酶切的效果，请问你还知不知道有其他的方法
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3楼2015-12-29 11:06:00
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科学小覃

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tianyufeiyu at 2015-12-29 11:06:00
也就是说电泳是可以看到酶切的效果，请问你还知不知道有其他的方法...

做一个转化，线性质粒一般转不进细菌里，若正常转化一个转化子都没有，则酶切基本完全。
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生物科学
4楼2015-12-29 21:24:32
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