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tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 质粒单酶切，通过电泳能否知道酶切是否充分已有3人参与

我用EcoRV酶切pCDNA3.1/V5-HisB,我想知道酶切的是否充分，还请各位大神不吝赐教，谢谢啦

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1楼 2015-12-28 16:57:53

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gyesang

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引用回帖:

8楼: Originally posted by szlylk0105 at 2015-12-31 10:26:32
质粒有3种存在形态，环形、半环、线形。而这三种形态的质粒在琼脂糖凝胶电泳中的运动速度不一样，为环形>半环>线形。所以线性化后的质粒要比之前跑的慢，也就是分子量大。

“所以线性化后的质粒要比之前跑的慢，也就是分子量大”，这句话不对，无论是你说的环形，半环，线形质粒DNA（你这里的术语也不专业），它们的分子量是一样大，因为碱基数还是一样，不同的是cccDNA, ocDNA, linear DNA它们的空间构象不一样，所以共价闭合环状DNA的泳动速度大于线性DNA大于开环DNA，开环DNA跑得最慢