24小时热门版块排行榜    

查看: 4923  |  回复: 17

tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

[求助] 质粒单酶切,通过电泳能否知道酶切是否充分 已有3人参与

我用EcoRV酶切pCDNA3.1/V5-HisB,我想知道酶切的是否充分,还请各位大神不吝赐教,谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
4楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-29 21:24:32
做一个转化,线性质粒一般转不进细菌里,若正常转化一个转化子都没有,则酶切基本完全。...

“线性质粒一般转不进细菌里”,你这个说法不对,线性质粒照样可以转进细菌感受态细胞,如果单酶切后没有进行去磷酸化处理,细菌会将其修复,从而质粒可以在细菌细胞内复制,如果进行了去磷酸化处理,线性DNA不能被修复成环状,从而不能复制
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
11楼2015-12-31 10:56:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
8楼: Originally posted by szlylk0105 at 2015-12-31 10:26:32
质粒有3种存在形态,环形、半环、线形。而这三种形态的质粒在琼脂糖凝胶电泳中的运动速度不一样,为环形>半环>线形。所以线性化后的质粒要比之前跑的慢,也就是分子量大。

“所以线性化后的质粒要比之前跑的慢,也就是分子量大”,这句话不对,无论是你说的环形,半环,线形质粒DNA(你这里的术语也不专业),它们的分子量是一样大,因为碱基数还是一样,不同的是cccDNA, ocDNA, linear DNA它们的空间构象不一样,所以共价闭合环状DNA的泳动速度大于线性DNA大于开环DNA,开环DNA跑得最慢
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
9楼2015-12-31 10:52:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
tianyufeiyu: 金币+3 2016-01-14 16:22:04
tianyufeiyu: 金币+2 2016-01-14 16:24:55
线性质粒一般要比超螺旋质粒跑得慢,如果酶切后电泳只有一条带就应该是酶切充分了,跑得时间要长一点,最好加个未酶切的作对照。
生物科学
2楼2015-12-28 19:27:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-28 19:27:59
线性质粒一般要比超螺旋质粒跑得慢,如果酶切后电泳只有一条带就应该是酶切充分了,跑得时间要长一点,最好加个未酶切的作对照。

也就是说电泳是可以看到酶切的效果,请问你还知不知道有其他的方法
3楼2015-12-29 11:06:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by tianyufeiyu at 2015-12-29 11:06:00
也就是说电泳是可以看到酶切的效果,请问你还知不知道有其他的方法...

做一个转化,线性质粒一般转不进细菌里,若正常转化一个转化子都没有,则酶切基本完全。
生物科学
4楼2015-12-29 21:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-28 19:27:59
线性质粒一般要比超螺旋质粒跑得慢,如果酶切后电泳只有一条带就应该是酶切充分了,跑得时间要长一点,最好加个未酶切的作对照。

谢谢
5楼2015-12-30 11:22:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-29 21:24:32
做一个转化,线性质粒一般转不进细菌里,若正常转化一个转化子都没有,则酶切基本完全。...

这是我的酶切后的电泳图,第1个孔是没酶切的质粒,2-4孔是酶切后的,请你帮我分析下,酶切的怎么样
质粒单酶切,通过电泳能否知道酶切是否充分
]EX5{3QW~YV1Y7VZ`IPUTLF.png

6楼2015-12-30 11:26:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by tianyufeiyu at 2015-12-30 11:26:11
这是我的酶切后的电泳图,第1个孔是没酶切的质粒,2-4孔是酶切后的,请你帮我分析下,酶切的怎么样

]EX5{3QW~YV1Y7VZ`IPUTLF.png
...

应该没问题了
生物科学
7楼2015-12-30 16:03:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

szlylk0105

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒有3种存在形态,环形、半环、线形。而这三种形态的质粒在琼脂糖凝胶电泳中的运动速度不一样,为环形>半环>线形。所以线性化后的质粒要比之前跑的慢,也就是分子量大。
8楼2015-12-31 10:26:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-30 16:03:03
应该没问题了...

谢谢
10楼2015-12-31 10:55:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tianyufeiyu 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 本子写完了,给DS兄弟看了,得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分,求调剂 +5 wsl111 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:45 by 暮雨星晴
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[考研] 292求调剂 +6 yhk_819 2026-02-28 6/300 2026-03-01 23:23 by 向上的胖东
[考研] 0856材料与化工,270求调剂 +6 YXCT 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:21 by 向上的胖东
[考研] 0805总分292,求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见