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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒单酶切，通过电泳能否知道酶切是否充分
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
4楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-29 21:24:32
做一个转化，线性质粒一般转不进细菌里，若正常转化一个转化子都没有，则酶切基本完全。...

“线性质粒一般转不进细菌里”，你这个说法不对，线性质粒照样可以转进细菌感受态细胞，如果单酶切后没有进行去磷酸化处理，细菌会将其修复，从而质粒可以在细菌细胞内复制，如果进行了去磷酸化处理，线性DNA不能被修复成环状，从而不能复制
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11楼2015-12-31 10:56:28
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科学小覃

木虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by gyesang at 2015-12-31 10:56:28
“线性质粒一般转不进细菌里”，你这个说法不对，线性质粒照样可以转进细菌感受态细胞，如果单酶切后没有进行去磷酸化处理，细菌会将其修复，从而质粒可以在细菌细胞内复制，如果进行了去磷酸化处理，线性DNA不能被 ...

谢谢订正。
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生物科学
12楼2015-12-31 11:47:46
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tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by gyesang at 2015-12-31 10:56:28
“线性质粒一般转不进细菌里”，你这个说法不对，线性质粒照样可以转进细菌感受态细胞，如果单酶切后没有进行去磷酸化处理，细菌会将其修复，从而质粒可以在细菌细胞内复制，如果进行了去磷酸化处理，线性DNA不能被 ...

请问用什么方法检测，就可以知道酶切是否充分呢？
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13楼2016-01-07 16:27:05
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經天

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

环形质粒跑电泳，一般都是三条带，所以如果酶切完全几乎看不到其他条带，这个酶我切过，NEB的，过夜几乎都可以完全酶切，跑个电泳一条带就没什么问题，祝实验顺利。
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一种与世无争的上进，内在的坚毅和质朴无华的大度！【穷吾一生而追求之！】
14楼2016-01-08 12:15:01
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tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 經天 at 2016-01-08 12:15:01
环形质粒跑电泳，一般都是三条带，所以如果酶切完全几乎看不到其他条带，这个酶我切过，NEB的，过夜几乎都可以完全酶切，跑个电泳一条带就没什么问题，祝实验顺利。

这是我用EcoR V切的产物的电泳图，你帮我看下是不是切割完全了，谢谢啦

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15楼2016-01-08 13:15:47
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經天

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by tianyufeiyu at 2016-01-08 13:15:47
这是我用EcoR V切的产物的电泳图，你帮我看下是不是切割完全了，谢谢啦
...

酶切的挺好，回收了可以做下一步连接了。
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tianyufeiyu
一种与世无争的上进，内在的坚毅和质朴无华的大度！【穷吾一生而追求之！】
16楼2016-01-08 13:19:56
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tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by 經天 at 2016-01-08 13:19:56
酶切的挺好，回收了可以做下一步连接了。...

谢谢

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17楼2016-01-08 13:25:41
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xiangshengyan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tianyufeiyu at 2015-12-30 11:26:11
这是我的酶切后的电泳图，第1个孔是没酶切的质粒，2-4孔是酶切后的，请你帮我分析下，酶切的怎么样

]EX5{3QW~YV1Y7VZ`IPUTLF.png
...

too much plasmid for digestion
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ANNA&KEVIN
18楼2016-01-09 11:47:06
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