| 查看: 5446 | 回复: 20 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
siyuansing银虫 (小有名气)
|
[求助]
加了酶切位点的引物扩增不出目的片段 已有6人参与
|
|
|
扩增一个800bp的片段，引物的5‘端不加酶切位点就能扩增出来，加了酶切位点就扩增不出来是什么情况？ 如图，从左向右依次是marker、无酶切位点的引物、有酶切位点的引物、有酶切位点和保护碱基的引物 引物列表如下 上引物无酶切位点：GTACAGACAAGAAACGCGTCA 下引物无酶切位点：TGGGAAGAAGACAGAGCTCTG 上引物+酶切位点：AAGCTTGTACAGACAAGAAACGCGTCA 下引物+酶切位点：CCTGCAGGTGGGAAGAAGACAGAGCTCTG 上引物+酶切位点+保护碱基：GGCAAGCTTGTACAGACAAGAAACGCGTCA 下引物+酶切位点+保护碱基：AAAACCTGCAGGTGGGAAGAAGACAGAGCTCTG 以上引物都是从5’端→3'端 后来实在扩增不出来，放弃前段300bp，在该800bp片段扩增后面500bp，改变上引物、保留下引物，依然是只有无酶切位点才能扩增的出来，加了酶切位点以后就扩增不出来。这个问题困扰了半个月了，求大神解救，万分感激。  PC 2015-12-06 12 时 40 分 土曲霉pdc启动子.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有164人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 菌检
已经有10人回复
- 如何加上酶切位点和保护碱基构建目的基因的表达载体？
已经有1人回复
- 克隆的片段连不上T载体怎么回事？？？
已经有21人回复
- PCR设计引物算Tm和CG含量的问题，help，help
已经有2人回复
- 连接、转化以及酶切问题
已经有0人回复
- 大神请留步！！！长片段ＰＣＲ扩增！！！
已经有5人回复
- 糊涂了，不知到底要不要考虑移码的问题？
已经有4人回复
- 酶切位点影响这么大吗？
已经有1人回复
- 【交流】生物实验小技巧－抛玉引玉(欢迎大家分享自己的经验与技巧~~)
已经有48人回复
- 【转帖】PCR污染与对策
已经有9人回复
- 【求助/交流】亚细胞定位载体构建时遇到的问题
已经有4人回复
- 【专题】PCR实验技术指南
已经有535人回复
shanyue00
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 6765.6
- 散金: 1750
- 红花: 11
- 沙发: 1
- 帖子: 2493
- 在线: 308.5小时
- 虫号: 3323671
- 注册: 2014-07-15
- 专业: 教学论
3楼2015-12-13 18:15:55
2楼2015-12-13 14:43:52
4楼2015-12-13 18:21:52
科学小覃
木虫 (正式写手)
- 应助: 43 (小学生)
- 金币: 2426.9
- 散金: 100
- 红花: 8
- 帖子: 725
- 在线: 86.1小时
- 虫号: 3126634
- 注册: 2014-04-10
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2015-12-13 20:06:13
10