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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » western有杂带怎么回事？
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liuwukang

新虫 (小有名气)

[交流] western有杂带怎么回事？ 已有4人参与

一抗是生工的his抗体，做的是原核表达的蛋白，二抗用的荧光标记，有杂带怎么回事？

western有杂带怎么回事？
1.jpg
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1楼 2015-12-04 17:02:27
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forcechen

银虫 (小有名气)
★
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你的一抗是多抗吗？

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2楼2015-12-05 12:20:54
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总有二狗咬朕

银虫 (小有名气)
★
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Western blot结果中杂带较多

可能的原因及建议
1.一抗是多抗。
2.一抗特异性不高——重新选择或制备高特异性的抗体。
3.样本处理过程中目的蛋白发生降解——加入蛋白酶抑制剂；样本处理时在冰上操作
4.目的蛋白有其它剪切本——查阅文献或生物信息学分析可能性。
5.上样量过高，太敏感——适当减少上样量。
具体可以看看蛋白表达纯化＞Wsetern  Blot的常见问题
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我好累，承受这个年纪不该有的帅！
7楼2015-12-07 10:04:08
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普通回帖

北国佳人

铜虫 (小有名气)
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从抗体纯度，，洗涤，包被等方面检查下
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努力的小蜜蜂
3楼2015-12-06 11:47:18
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by forcechen at 2015-12-05 12:20:54
你的一抗是多抗吗？

是的，生工买的兔多抗
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4楼2015-12-06 13:06:58
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forcechen

银虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
4楼: Originally posted by liuwukang at 2015-12-06 13:06:58
是的，生工买的兔多抗...

那就正常了。结果有没有你要的目的条带？如果有，那就有结果咯。

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5楼2015-12-06 13:23:33
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匿名

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6楼2015-12-07 05:38:05
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 弦山小栗 at 2015-12-07 05:38:05
跑的带不错，

哈哈是的，强迫症的人无法接受条带歪歪扭扭
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8楼2015-12-07 12:38:16
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 总有二狗咬朕 at 2015-12-07 10:04:08
Western blot结果中杂带较多

可能的原因及建议
1.一抗是多抗。
2.一抗特异性不高——重新选择或制备高特异性的抗体。
3.样本处理过程中目的蛋白发生降解——加入蛋白酶抑制剂；样本处理时在冰上操作
4.目的蛋 ...

一般蛋白上样量在多少比较合适啊？我几个样本浓度是调节的差不多，但是我不知道上多少合适
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9楼2015-12-07 12:38:49
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匿名

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10楼2015-12-07 12:39:18
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