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liuwukang

新虫 (小有名气)

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专业: 微生物学

[交流] western有杂带怎么回事？已有4人参与

一抗是生工的his抗体，做的是原核表达的蛋白，二抗用的荧光标记，有杂带怎么回事？

1.jpg

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1楼 2015-12-04 17:02:27

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总有二狗咬朕

银虫 (小有名气)

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注册: 2015-10-15
专业: 生物化工与食品化工

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

Western blot结果中杂带较多

可能的原因及建议
1.一抗是多抗。
2.一抗特异性不高——重新选择或制备高特异性的抗体。
3.样本处理过程中目的蛋白发生降解——加入蛋白酶抑制剂；样本处理时在冰上操作
4.目的蛋白有其它剪切本——查阅文献或生物信息学分析可能性。
5.上样量过高，太敏感——适当减少上样量。
具体可以看看蛋白表达纯化＞Wsetern Blot的常见问题