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做的质粒应该是6000bp。结果提质粒后跑胶只有3000bp左右 已有3人参与
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| 酶切后5500bp的载体和600bp的目的片段连接、转化、培养、提质粒后跑胶只有3000bp左右了，这应该是哪个方面出了问题呢？ |
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xufengnbu
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hufan2441
2楼2015-11-26 21:52:57
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5楼2015-11-26 22:35:19
xufengnbu
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q120465872
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【答案】应助回帖
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hufan2441: 金币+40, ★★★★★最佳答案 2015-11-30 10:24:44
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hufan2441: 金币+40, ★★★★★最佳答案 2015-11-30 10:24:44
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质粒有三种形态的，我前面给人回帖讲过这个，不过手机不太好找出来给你看。简单点说就是，质粒大部分是超螺旋态，跑的比线性DNA快，所以跟marker比显得比较小。另外开环形态的比例较低，大小跟marker一致，这就是你看到的浅带为什么正确。所以你的质粒应该没问题。 睡懒觉迷糊中，质粒三个形态的概念记不清了，我说的可能有疏漏，但大概是那么个意思，你自己再查查吧，百度都可以查到。 发自小木虫IOS客户端 |
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8楼2015-11-27 09:12:00
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q120465872
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这个状况其实并不影响你后续的实验，如果你能确定你实验过程没有问题。不放心可以酶切或者测序确定。 正常的质粒，浓度较高的情况下很容易看到三条带的，不需要过分纠结这个问题。 不过需要注意一点，提质粒过程中试剂盒说明书上有提醒的，裂解时间、不能剧烈摇晃。这些步骤有可能导致基因组污染 发自小木虫IOS客户端 |
10楼2015-11-30 12:57:28
