| 查看: 2387 | 回复: 19 | ||
z631535213木虫 (正式写手)
|
[求助]
PCR后i电泳没目的条带， 求助啊 已有5人参与
|
|
|
买的市面上某根的KIT，取的体系是25ul：12.5ul PCR MIX ，5ul 模版，1ul 前引 （10uM） ，1ul后引（10uM），加dd水至25ul 设置的是 94° 3min， （94° 30s，55° 30s，72° 30s）20cycles ，72° 5min。 跑胶是3%的琼脂糖 60ml，5ul Mark。先是80V 20min，然后120V至结束 想请问下： 1.上面的设置有没有哪些不合理的啊？ 2.跑到Mark之前的是不是引物啊？Mark最下面那个是50bp的，Mark加了5ul/琼脂糖60ml，是不是少加点好？ 3.是不是进行一下梯度PCR来确定下退火温度啊？  2.jpg  IMG_0604.JPG |
回复此楼» 猜你喜欢
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有256人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR相关问题解答
已经有20人回复
- 目的片段一端是粘性末端,一端是平末端与相应载体的连接如何提高效率?急!
已经有32人回复
- PCR
已经有19人回复
- 酶切所得片段与预期不符
已经有4人回复
- PCR有关问题
已经有8人回复
- 【原创经验篇】由一个简单的酶切重组载体想到的..........
已经有31人回复
- 【原创】原创之六：环境样品总DNA的提取与纯化【已搜索无重复】
已经有178人回复
- 【求助/交流】PCR后电泳出现两条带是怎么回事？
已经有10人回复
- 【求助/交流】做过大引物全质粒PCR的进来看
已经有29人回复
- 基因克隆与亚克隆
已经有1人回复
liping121200
铜虫 (小有名气)
- 应助: 30 (小学生)
- 金币: 129.7
- 红花: 1
- 帖子: 82
- 在线: 39.3小时
- 虫号: 4060168
- 注册: 2015-09-09
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
z631535213: 金币+8, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2015-11-19 16:08:15
感谢参与，应助指数 +1
z631535213: 金币+8, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2015-11-19 16:08:15
|
1、引物加1uL可以的，你的模板加的有点多，一般也是加1uL就够了，但要根据你的浓度 2、你的循环数少了点，一般30-35个循环，你才20个 3、你的胶浓度过高，一般0.5%-1%就可以了 4、你的marker 点的太多，一般点2-3uL就可以 5、你跑DNA产物，不用弄得这么麻烦，80v的电压跑的太慢了，你可以直接调到110-120v的电压，跑30分钟左右就很好了 6、你跑出来的东西基本上就不是你的目的条带，可以设置个温度梯度跑跑看 |
9楼2015-11-19 14:10:35
liping121200
铜虫 (小有名气)
- 应助: 30 (小学生)
- 金币: 129.7
- 红花: 1
- 帖子: 82
- 在线: 39.3小时
- 虫号: 4060168
- 注册: 2015-09-09
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
10楼2015-11-19 14:12:26
a86052
金虫 (正式写手)
- 应助: 151 (高中生)
- 金币: 1648.5
- 散金: 110
- 红花: 8
- 帖子: 561
- 在线: 737.5小时
- 虫号: 864561
- 注册: 2009-10-07
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2015-11-19 08:50:25
z631535213
木虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 2458.4
- 红花: 3
- 帖子: 479
- 在线: 113.5小时
- 虫号: 2756319
- 注册: 2013-10-27
- 性别: GG
- 专业: 基因组学
3楼2015-11-19 10:11:46
a86052
金虫 (正式写手)
- 应助: 151 (高中生)
- 金币: 1648.5
- 散金: 110
- 红花: 8
- 帖子: 561
- 在线: 737.5小时
- 虫号: 864561
- 注册: 2009-10-07
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2015-11-19 10:18:54
z631535213
木虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 2458.4
- 红花: 3
- 帖子: 479
- 在线: 113.5小时
- 虫号: 2756319
- 注册: 2013-10-27
- 性别: GG
- 专业: 基因组学
5楼2015-11-19 10:45:33
|
感觉没有特异条带，可以试试降低退货火温度，或者提高一下循环次数（我一般都是30循环）。感觉楼主的Mark好了亮哦，可少点一些不吧。 想问楼主为啥跑电源的时候还要改变电压啊？（我也刚开始做实验，我都说一个电压跑结束的） 发自小木虫Android客户端 |
6楼2015-11-19 11:19:37
z631535213
木虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 2458.4
- 红花: 3
- 帖子: 479
- 在线: 113.5小时
- 虫号: 2756319
- 注册: 2013-10-27
- 性别: GG
- 专业: 基因组学
7楼2015-11-19 11:30:04
8楼2015-11-19 13:30:42
50