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caas-weihua

金虫 (小有名气)

[求助] RNA的反转问题 已有1人参与

请问,反转录的cDNA,对照使用takara的反转录试剂盒mix直接反转成的cDNA,实验组是用takara的另一反转录试剂盒先42°去除DNA,然后再加mix反转的cDNA。这两种反转录成的cDNA同时拿来做模板做Q-PCR,做出的结果可信吗?会出问题吗?
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jackyoung

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-11-17 20:46:36
caas-weihua: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-11-17 21:06:16
先问几个问题:
1.如果不去除基因组,体系怎么配的?
2.实验的目的是什么?比较不去基因组对qPCR的影响么?

如果体系不对,可能会影响反转录的效率。

如果不去除基因组就做定量,问题主要取决于基因组污染的多少了,重复性不好,结果也不稳定,更不可靠。

发自小木虫Android客户端
CestLaVie
2楼2015-11-17 20:28:36
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caas-weihua

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jackyoung at 2015-11-17 20:28:36
先问几个问题:
1.如果不去除基因组,体系怎么配的?
2.实验的目的是什么?比较不去基因组对qPCR的影响么?
如果体系不对,可能会影响反转录的效率。
如果不去除基因组就做定量,问题主要取决于基因组污染的多少了, ...

嗯,我觉得要还是用一种类型的试剂盒坐下来吧,谢谢!
3楼2015-11-17 21:05:53
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caas-weihua

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jackyoung at 2015-11-17 20:28:36
先问几个问题:
1.如果不去除基因组,体系怎么配的?
2.实验的目的是什么?比较不去基因组对qPCR的影响么?
如果体系不对,可能会影响反转录的效率。
如果不去除基因组就做定量,问题主要取决于基因组污染的多少了, ...

嗯,我觉得还是用一种试剂盒做完所有的吧,谢谢!
4楼2015-11-17 21:06:46
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