应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » cDNA模板PCR弥散带
121/2返回列表12下一页
查看: 2614  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

济云帆

新虫 (初入文坛)

[求助] cDNA模板PCR弥散带 已有1人参与

现在用的是cDNA为模板，SRAP 的引物，扩增。做了好几天都没有条带。而是弥散条带。反转录用的RevertAid first strand cDNA synthesis kit. RNA检测没问题。A260/280 在2左右。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-10-27 19:41:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

兽医做科研

金虫 (小有名气)
你好，最近我也在做cDNA，我想请教一下，cDNA做模板进行pcr扩增的时候，cDNA加多少量
赞一下 回复此楼
2楼2015-10-27 20:37:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangchun0
引用回帖:
2楼: Originally posted by 兽医做科研 at 2015-10-27 20:37:59
你好，最近我也在做cDNA，我想请教一下，cDNA做模板进行pcr扩增的时候，cDNA加多少量

1ul

发自小木虫Android客户端
3楼2015-10-27 23:35:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

济云帆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 兽医做科研 at 2015-10-27 20:37:59
你好，最近我也在做cDNA，我想请教一下，cDNA做模板进行pcr扩增的时候，cDNA加多少量

我一般是测了浓度，稀释成20ng/ul。原来能P出来的时候。大概浓度在100ng/20ul。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2015-10-28 06:32:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

兽医做科研

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 济云帆 at 2015-10-28 06:32:36
我一般是测了浓度，稀释成20ng/ul。原来能P出来的时候。大概浓度在100ng/20ul。
...

我觉得cDNA不好测浓度啊，体系里面的试剂比较多，我也是加了1微升，只是个别泳道跑出了很浅的条带，我也很郁闷
赞一下 回复此楼
5楼2015-10-28 17:21:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

兽医做科研

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yangchun0 at 2015-10-27 23:35:05
1ul
...

嗯，我就是加了1ul
赞一下 回复此楼
6楼2015-10-28 17:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

骆驼人

金虫 (正式写手)
我一般反转录时10微体系RNA量加1ug，之后稀释8-10倍，利用内参基因检测一下，再进行后续实验。反转录的盒子也比较重要

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
愿你，温柔又坚定，不轻易许诺但许的诺一定会实现，有勇气有力量，会发现一切美好的事物
7楼2015-10-28 19:37:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

济云帆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 骆驼人 at 2015-10-28 19:37:26
我一般反转录时10微体系RNA量加1ug，之后稀释8-10倍，利用内参基因检测一下，再进行后续实验。反转录的盒子也比较重要

我今天换了模板，换了酶，还是弥散条带。是不是引物有问题

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
8楼2015-10-28 22:57:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Romaner007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-30 21:27:23
应该是引物，退火温度问题！可以适当的提高退火温度试试
赞一下 回复此楼
人的一切都应该是美丽的！
9楼2015-10-30 12:26:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

济云帆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Romaner007 at 2015-10-30 12:26:14
应该是引物，退火温度问题！可以适当的提高退火温度试试

提高了了退火温度。还是不行

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
10楼2015-10-30 23:24:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 济云帆 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +4 Tide man 2026-08-11 4/200 2026-08-12 00:39 by liuqidi
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +17 Lanmanbaby 2026-08-09 29/1450 2026-08-12 00:24 by zhanghaozhu
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +3 工厂打螺丝 2026-08-08 3/150 2026-08-11 13:42 by 会议编辑
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] filecode +9 documentary 2026-08-10 9/450 2026-08-11 10:08 by wk7465
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭