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济云帆

新虫 (初入文坛)

[求助] cDNA模板PCR弥散带 已有1人参与

现在用的是cDNA为模板,SRAP 的引物,扩增。做了好几天都没有条带。而是弥散条带。反转录用的RevertAid first strand cDNA synthesis kit. RNA检测没问题。A260/280 在2左右。
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济云帆

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 骆驼人 at 2015-10-28 19:37:26
我一般反转录时10微体系RNA量加1ug,之后稀释8-10倍,利用内参基因检测一下,再进行后续实验。反转录的盒子也比较重要

我今天换了模板,换了酶,还是弥散条带。是不是引物有问题

发自小木虫IOS客户端
8楼2015-10-28 22:57:02
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兽医做科研

金虫 (小有名气)

你好,最近我也在做cDNA,我想请教一下,cDNA做模板进行pcr扩增的时候,cDNA加多少量
2楼2015-10-27 20:37:59
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引用回帖:
2楼: Originally posted by 兽医做科研 at 2015-10-27 20:37:59
你好,最近我也在做cDNA,我想请教一下,cDNA做模板进行pcr扩增的时候,cDNA加多少量

1ul

发自小木虫Android客户端
3楼2015-10-27 23:35:05
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济云帆

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 兽医做科研 at 2015-10-27 20:37:59
你好,最近我也在做cDNA,我想请教一下,cDNA做模板进行pcr扩增的时候,cDNA加多少量

我一般是测了浓度,稀释成20ng/ul。原来能P出来的时候。大概浓度在100ng/20ul。

发自小木虫IOS客户端
4楼2015-10-28 06:32:36
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