应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » cDNA模板PCR弥散带
121/2返回列表12下一页
查看: 2653  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

济云帆

新虫 (初入文坛)

[求助] cDNA模板PCR弥散带 已有1人参与

现在用的是cDNA为模板，SRAP 的引物，扩增。做了好几天都没有条带。而是弥散条带。反转录用的RevertAid first strand cDNA synthesis kit. RNA检测没问题。A260/280 在2左右。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-10-27 19:41:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

兽医做科研

金虫 (小有名气)
你好，最近我也在做cDNA，我想请教一下，cDNA做模板进行pcr扩增的时候，cDNA加多少量
赞一下 回复此楼
2楼2015-10-27 20:37:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangchun0
引用回帖:
2楼: Originally posted by 兽医做科研 at 2015-10-27 20:37:59
你好，最近我也在做cDNA，我想请教一下，cDNA做模板进行pcr扩增的时候，cDNA加多少量

1ul

发自小木虫Android客户端
3楼2015-10-27 23:35:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

济云帆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 兽医做科研 at 2015-10-27 20:37:59
你好，最近我也在做cDNA，我想请教一下，cDNA做模板进行pcr扩增的时候，cDNA加多少量

我一般是测了浓度，稀释成20ng/ul。原来能P出来的时候。大概浓度在100ng/20ul。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2015-10-28 06:32:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

兽医做科研

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 济云帆 at 2015-10-28 06:32:36
我一般是测了浓度，稀释成20ng/ul。原来能P出来的时候。大概浓度在100ng/20ul。
...

我觉得cDNA不好测浓度啊，体系里面的试剂比较多，我也是加了1微升，只是个别泳道跑出了很浅的条带，我也很郁闷
赞一下 回复此楼
5楼2015-10-28 17:21:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

兽医做科研

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yangchun0 at 2015-10-27 23:35:05
1ul
...

嗯，我就是加了1ul
赞一下 回复此楼
6楼2015-10-28 17:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

骆驼人

金虫 (正式写手)
我一般反转录时10微体系RNA量加1ug，之后稀释8-10倍，利用内参基因检测一下，再进行后续实验。反转录的盒子也比较重要

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
愿你，温柔又坚定，不轻易许诺但许的诺一定会实现，有勇气有力量，会发现一切美好的事物
7楼2015-10-28 19:37:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

济云帆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 骆驼人 at 2015-10-28 19:37:26
我一般反转录时10微体系RNA量加1ug，之后稀释8-10倍，利用内参基因检测一下，再进行后续实验。反转录的盒子也比较重要

我今天换了模板，换了酶，还是弥散条带。是不是引物有问题

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
8楼2015-10-28 22:57:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Romaner007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-30 21:27:23
应该是引物，退火温度问题！可以适当的提高退火温度试试
赞一下 回复此楼
人的一切都应该是美丽的！
9楼2015-10-30 12:26:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

济云帆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Romaner007 at 2015-10-30 12:26:14
应该是引物，退火温度问题！可以适当的提高退火温度试试

提高了了退火温度。还是不行

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
10楼2015-10-30 23:24:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 济云帆 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +5 雨打竹帘 2026-08-30 9/450 2026-08-30 22:23 by 余韵清
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭