应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » In-fusion 连接
51/1返回列表
查看: 3807  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

fMssop

新虫 (初入文坛)

[求助] In-fusion 连接 已有1人参与

实验室采用In-fusion 连接的方法，连接质粒与目的片段。 将质粒用相应酶切之后，用In-fusion酶连接，之后转化。发现连接效率特别低，生长周期很长，甚至出现过连接不上的情况，请问有什么解决方法。体系如下

IN-fusion 酶 1微升
载体      2微升
目的片段 2微升
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-10-20 21:48:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

赵鑫易

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
说一下我的个人做法，
1.质粒载体，双酶切后再回收总感觉浓度不够，索性20u酶切体系中加入1ug质粒酶切（限制酶说明是1-1.5ug），然后按infusion说明书上说的，酶切后65°c（大概是这个）保温几分钟使限制酶失活，每次做的时候取3ul左右（放了半个月左右，又拿出来用了一次还是没问题）。
2.pcr产物试剂盒纯化后测下浓度，适当稀释后使用

lz配方写的太简略了，没说什么牌子什么产品，并且没有说明质粒和片段浓度，还有，lz你是不是没加缓冲液
赞一下 回复此楼
3楼2015-10-20 23:39:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

骆驼人

金虫 (正式写手)
酶切之后最好胶回收，或纯化一下

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
愿你，温柔又坚定，不轻易许诺但许的诺一定会实现，有勇气有力量，会发现一切美好的事物
2楼2015-10-20 22:54:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tolobio

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 10:08:49
本帖内容被屏蔽
4楼2015-10-21 08:16:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fMssop

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 赵鑫易 at 2015-10-20 23:39:41
说一下我的个人做法，
1.质粒载体，双酶切后再回收总感觉浓度不够，索性20u酶切体系中加入1ug质粒酶切（限制酶说明是1-1.5ug），然后按infusion说明书上说的，酶切后65°c（大概是这个）保温几分钟使限制酶失活，每 ...

酶是TAKARA公司的，貌似不用缓冲液，直接加酶。片段和载体大概100ng/ul左右。
赞一下 回复此楼
5楼2015-10-22 18:09:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 00:41 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 3/150 2026-08-29 23:14 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:33 by 4qO8zhfjr2AX
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:22 by 4qO8zhfjr2AX
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 3/150 2026-08-29 18:26 by 4FFAWE8HcgUD
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 17:30 by 4FFAWE8HcgUD
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭