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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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fMssop

新虫 (初入文坛)

[求助] In-fusion 连接 已有1人参与

实验室采用In-fusion 连接的方法,连接质粒与目的片段。 将质粒用相应酶切之后,用In-fusion酶连接,之后转化。发现连接效率特别低,生长周期很长,甚至出现过连接不上的情况,请问有什么解决方法。体系如下

IN-fusion 酶 1微升
载体      2微升
目的片段 2微升
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骆驼人

金虫 (正式写手)

酶切之后最好胶回收,或纯化一下

发自小木虫Android客户端
愿你,温柔又坚定,不轻易许诺但许的诺一定会实现,有勇气有力量,会发现一切美好的事物
2楼2015-10-20 22:54:38
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赵鑫易

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
说一下我的个人做法,
1.质粒载体,双酶切后再回收总感觉浓度不够,索性20u酶切体系中加入1ug质粒酶切(限制酶说明是1-1.5ug),然后按infusion说明书上说的,酶切后65°c(大概是这个)保温几分钟使限制酶失活,每次做的时候取3ul左右(放了半个月左右,又拿出来用了一次还是没问题)。
2.pcr产物试剂盒纯化后测下浓度,适当稀释后使用

lz配方写的太简略了,没说什么牌子什么产品,并且没有说明质粒和片段浓度,还有,lz你是不是没加缓冲液
3楼2015-10-20 23:39:41
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tolobio

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 10:08:49
本帖内容被屏蔽

4楼2015-10-21 08:16:13
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fMssop

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 赵鑫易 at 2015-10-20 23:39:41
说一下我的个人做法,
1.质粒载体,双酶切后再回收总感觉浓度不够,索性20u酶切体系中加入1ug质粒酶切(限制酶说明是1-1.5ug),然后按infusion说明书上说的,酶切后65°c(大概是这个)保温几分钟使限制酶失活,每 ...

酶是TAKARA公司的,貌似不用缓冲液,直接加酶。片段和载体大概100ng/ul左右。
5楼2015-10-22 18:09:27
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