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in-fusion连接，农杆菌介导转化真菌，但是第一步做连接时就出问题了已有3人参与
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各位大侠，先说一下我的大体实验。现有目的基因（这个基因本身我们的真菌里就有），和质粒（此质粒里有强启动子）。我们实验的最终目的是希望通过强启动子使这个目的基因高表达。 现在是实验的第一步，就是将目的基因导入质粒中。然后质粒转入农杆菌，再用农杆菌侵染真菌。 第一步之后，拿到重组质粒，想看看目的基因有没有导入进去，就进行了PCR扩增，但是跑胶时出现两条带，800bp和300bp。但是目的基因刚好是1100. 急求各位大侠分析一下，这是什么情况。。。。难道连接时目的基因断了？ 另外，农杆菌介导转化之后，与我的真菌侵染，我想加的强启动子，是不是会随机到任何基因前，那不是就没有办法保证高表达我的目的基因了吗。 我是这方面的新手，恳请各位多多指导，谢谢。 |
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