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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 关于SDS-PAGE电泳问题
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宇文诗畅

银虫 (小有名气)

[求助] 关于SDS-PAGE电泳问题 已有2人参与

SDS-PAGE中为什么分离胶可以分离不同分子量大小的蛋白亚基而浓缩胶只能将蛋白质压成一条窄带
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做好自己的事！
1楼 2015-10-19 13:18:49
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
宇文诗畅: 金币+1, ★有帮助 2015-10-19 14:02:59
浓缩胶也可以起分离作用，浓缩效应并不是浓缩胶引起，而是浓缩胶和分离胶在交界处的pH、胶浓度、离子强度不连续引起的。
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2楼2015-10-19 13:47:08
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syhzlsd

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
宇文诗畅: 金币+4, ★★★★★最佳答案, 解释的很详细 2015-10-19 14:00:56
浓缩胶和分离胶的PH值不同，前者主要表现为浓缩效用，后者表现为电荷效用和分子筛效用。浓缩效应主要在浓缩胶中完成，浓缩胶的pH6.8，在这个pH条件下，缓冲液中的HCl的Cl离子几乎全部解离，Gly的等电点为6.0，仅少数解离为负离子，在电场中移动速度很慢。酸性蛋白质在此pH下解离为负离子，三类离子的迁移速率为Cl>一般蛋白质>Gly，电泳开始后，Cl离子泳动快，在其后留下一个低离子浓度区。Gly在电场中移动很慢，造成移动离子的缺乏，于是快慢离子间就形成了一个缺少离子的高压区，在高压区内所有的负离子都会加速移动，当移到Cl离子区域时，高电压消失，蛋白质的移动速度慢下来，当以上稳定状态建立后，蛋白质样品在快慢离子间被浓缩形成一个狭小的之间层，并按蛋白质所带负电荷量的多少依次排列成带，浓缩样品，从浓缩胶进入分离胶后，胶的pH升高，Gly的离解度增大，泳动率上升，又因为它分子小，故超过所有的蛋白质分子，紧跟在Cl离子后，Cl离子迁移后，低离子浓度不再存在，形成了恒定的电场强度，因此，蛋白质样品在分离胶中的分离主要取决于它的电荷性质，分子大小和形状，分离胶的孔径有一定大小，对不同相对质量的蛋白质来说，通过时收到的滞阻作用不同，即使静电荷相等的颗粒，也会由于这种分子筛的效应，把不同大小的蛋白质相互分开。
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3楼2015-10-19 13:50:04
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宇文诗畅

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-10-19 13:50:04
浓缩胶和分离胶的PH值不同，前者主要表现为浓缩效用，后者表现为电荷效用和分子筛效用。浓缩效应主要在浓缩胶中完成，浓缩胶的pH6.8，在这个pH条件下，缓冲液中的HCl的Cl离子几乎全部解离，Gly的等电点为6.0，仅少数 ...

太感谢了！
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做好自己的事！
4楼2015-10-19 14:01:58
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宇文诗畅

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-10-19 13:47:08
浓缩胶也可以起分离作用，浓缩效应并不是浓缩胶引起，而是浓缩胶和分离胶在交界处的pH、胶浓度、离子强度不连续引起的。

谢谢大神的回答！
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做好自己的事！
5楼2015-10-19 14:03:50
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暗火无光

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-10-19 13:50:04
浓缩胶和分离胶的PH值不同，前者主要表现为浓缩效用，后者表现为电荷效用和分子筛效用。浓缩效应主要在浓缩胶中完成，浓缩胶的pH6.8，在这个pH条件下，缓冲液中的HCl的Cl离子几乎全部解离，Gly的等电点为6.0，仅少数 ...

原来是这样，之前用过但原理不是很清楚，非常感谢！
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6楼2015-10-20 12:01:21
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thetc

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-10-19 13:50:04
浓缩胶和分离胶的PH值不同，前者主要表现为浓缩效用，后者表现为电荷效用和分子筛效用。浓缩效应主要在浓缩胶中完成，浓缩胶的pH6.8，在这个pH条件下，缓冲液中的HCl的Cl离子几乎全部解离，Gly的等电点为6.0，仅少数 ...

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加入，希望能学习多一点
7楼2015-10-21 15:56:29
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