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ly476779208

银虫 (初入文坛)

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[求助] PCR后电泳的结果好奇怪，求帮忙分析。已有2人参与

PCR做了两个片段，A:1245bp；B1：2982bp；B2：2982bp
PCR体系如下：
试剂       体积（ 20ul）
ddH2O             9.6ul
10 x buffer       4ul
10×dNTP（2 .5mM）2ul
上游Primer（10 μM) 1ul
下游Primer（10 μM) 1ul
模板（123 ng/mL ) 2ul
酶 0.4ul
PCR条件：
98℃ 30s
98℃ 10s
55℃ 30s
72℃/68℃ Xmin
goto 5×
98℃ 30s
98℃ 10s
57℃ 30s
72℃/68℃ Xmin
goto 28×
72℃/68℃ 10min
4℃  保存

三个样，每个做了四管，先mix后分装，同一个体系配置的。1kb marker
A用GXL酶P的，所以延伸温度是68℃，电泳后结果不错，条带明亮，至今做过的最好的……（新手QAQ）
B1，B2用的phusion酶，延伸温度72℃，电泳后条带如图。
不知道为什么会出现这种条带有的没有，有的明亮有的暗淡的现象，因为是一个体系配的呀，确定各组分都加了。那么出现这种结果的原因是什么呢，明亮的条带是正确的吗？

A电泳结果条带明亮.png

B1.png

B2.png

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做实验哦QAQ

1楼 2015-08-26 09:06:53

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引用回帖:

9楼: Originally posted by ly476779208 at 2015-08-26 10:18:55
恩恩，图二图三的回收到的才1.4-2.4ng/ul左右。上次也出现这种情况，浓度特别低，所以就用回收到的目的片段当模板来二扩，结果电泳没条带，说明回收到的不是目的片段。所以我感觉这次也是一样……条带暗淡的话很难 ...

这倒是真的啊！要不直接pcr产物二次pcr

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