应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR后电泳的结果好奇怪，求帮忙分析。
151/2返回列表12下一页
查看: 1110  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ly476779208

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR后电泳的结果好奇怪，求帮忙分析。 已有2人参与

PCR做了两个片段，A:1245bp；B1：2982bp；B2：2982bp
PCR体系如下：
试剂        体积（ 20ul）
ddH2O                9.6ul
10 x buffer          4ul
10×dNTP（2 .5mM）2ul
上游Primer（10 μM) 1ul
下游Primer（10 μM) 1ul
模板（123 ng/mL ) 2ul
酶   0.4ul
PCR条件：
98℃   30s
98℃   10s
55℃   30s
72℃/68℃   Xmin
goto   5×
98℃   30s
98℃   10s
57℃   30s
72℃/68℃   Xmin
goto   28×
72℃/68℃   10min
4℃  保存

三个样，每个做了四管，先mix后分装，同一个体系配置的。1kb marker
A用GXL酶P的，所以延伸温度是68℃，电泳后结果不错，条带明亮，至今做过的最好的……（新手QAQ）
B1，B2用的phusion酶，延伸温度72℃，电泳后条带如图。
不知道为什么会出现这种条带有的没有，有的明亮有的暗淡的现象，因为是一个体系配的呀，确定各组分都加了。那么出现这种结果的原因是什么呢，明亮的条带是正确的吗？

PCR后电泳的结果好奇怪，求帮忙分析。
A电泳结果 条带明亮.png


PCR后电泳的结果好奇怪，求帮忙分析。-1
B1.png


PCR后电泳的结果好奇怪，求帮忙分析。-2
B2.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
做实验哦QAQ
1楼 2015-08-26 09:06:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

BBMC-2012

木虫 (知名作家)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ly476779208 at 2015-08-26 10:18:55
恩恩，图二图三的回收到的才1.4-2.4ng/ul左右。上次也出现这种情况，浓度特别低，所以就用回收到的目的片段当模板来二扩，结果电泳没条带，说明回收到的不是目的片段。所以我感觉这次也是一样……条带暗淡的话很难 ...

这倒是真的啊！要不直接pcr产物二次pcr

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2015-08-26 10:25:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

BBMC-2012

木虫 (知名作家)
很正常，有时候！可以用

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2015-08-26 09:42:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ly476779208

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by BBMC-2012 at 2015-08-26 09:42:06
很正常，有时候！可以用

好的，谢谢
我还想问问，图一那个胶，我进行后续切胶回收，四管合一终浓度才28.1ng/ul，这个回收效率是不是低了？图二图三基本上没回收到……
赞一下 回复此楼
做实验哦QAQ
3楼2015-08-26 09:49:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BBMC-2012

木虫 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ly476779208 at 2015-08-26 09:49:14
好的，谢谢
我还想问问，图一那个胶，我进行后续切胶回收，四管合一终浓度才28.1ng/ul，这个回收效率是不是低了？图二图三基本上没回收到……...

还好吧，可以啦！平时我只是10几

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2015-08-26 09:59:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BBMC-2012

木虫 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ly476779208 at 2015-08-26 09:49:14
好的，谢谢
我还想问问，图一那个胶，我进行后续切胶回收，四管合一终浓度才28.1ng/ul，这个回收效率是不是低了？图二图三基本上没回收到……...

这还好吧，应该有产物连接试试

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2015-08-26 10:00:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

929519755

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为什么退火温度先用55℃p5个cycle，在用57℃呢？
赞一下 回复此楼
想你没话说
6楼2015-08-26 10:02:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

929519755

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
ly476779208: 金币+2, ★有帮助, 还是谢谢哦 2015-08-27 10:55:09
如果你想增强特异性，又要获得较高产率，不是先用较高的退火温度，再用较低的退火温度好点吗？
感觉你这个用反了…………………………
赞一下 回复此楼
想你没话说
7楼2015-08-26 10:05:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ly476779208

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 929519755 at 2015-08-26 10:05:02
如果你想增强特异性，又要获得较高产率，不是先用较高的退火温度，再用较低的退火温度好点吗？
感觉你这个用反了…………………………

师姐的解释是，先用低的退火温度降低特异性，多扩增一下，然后再提高退火温度增强特异性，从而扩增目的片段。类似于增加了一些模板吧。
赞一下 回复此楼
做实验哦QAQ
8楼2015-08-26 10:15:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ly476779208

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by BBMC-2012 at 2015-08-26 09:59:06
还好吧，可以啦！平时我只是10几
...

恩恩，图二图三的回收到的才1.4-2.4ng/ul左右。上次也出现这种情况，浓度特别低，所以就用回收到的目的片段当模板来二扩，结果电泳没条带，说明回收到的不是目的片段。所以我感觉这次也是一样……条带暗淡的话很难回收到吗…QAQ
赞一下 回复此楼
做实验哦QAQ
9楼2015-08-26 10:18:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

929519755

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

……
没有见过这样的
如果你感觉产物太少，可以多扩增几个cycle啊
赞一下 回复此楼
想你没话说
10楼2015-08-26 10:19:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ly476779208 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +9 且听虎啸 2026-08-07 12/600 2026-08-07 21:53 by 理想三旬2025
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭