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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定量PCR问题！！求助
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蝎子熊

金虫 (小有名气)

[求助] 定量PCR问题！！求助 已有4人参与

如题：
好多定量的试剂盒，给出的PCR条件，在第二大步进行循环的时候，往往只有变性，和退火，没有延伸！这是为什么？？因为目的片段不大，所以这样子？但是往往在文献的方法里，在循环里都会有72度延伸这一步？ 请教明白的人给解答。
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科研搞不好罢了，身体一定要锻炼好~
1楼 2015-08-04 11:10:16
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
蝎子熊: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-08-04 11:28:44
PCR有两步法和三步法，两步法PCR把退火和延伸合并了而已
试剂盒说明书怎么写，你就怎么设
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2015-08-04 11:26:41
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蝎子熊

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-08-04 11:26:41
PCR有两步法和三步法，两步法PCR把退火和延伸合并了而已
试剂盒说明书怎么写，你就怎么设

我看文献大多是3步法，而试剂盒一般2步法，做得时候哪个作为重点参照呢？
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科研搞不好罢了，身体一定要锻炼好~
3楼2015-08-04 11:29:38
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柒筱六

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蝎子熊 at 2015-08-04 11:29:38
我看文献大多是3步法，而试剂盒一般2步法，做得时候哪个作为重点参照呢？...

用试剂盒提，按照试剂盒要求设条件就可以了
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4楼2015-08-04 13:59:39
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vivd娟

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

按照试剂盒说明来提
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5楼2015-08-07 15:39:42
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许彦

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

试剂盒里面是把退火延伸和在一步了，一般都是片段很小

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2015-08-07 15:51:55
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天秤座的女孩

铜虫 (初入文坛)
在退火温度与延伸温度接近或相同的时候，往往把二者合并为一步，把时间加长些，即所谓的两步PCR。
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7楼2015-08-18 19:05:33
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wangying67

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

跑上一个孔看看，哪个效果好，那个曲线比较陡，哪个起跳早
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8楼2015-08-19 08:17:13
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Mirlyn333

铜虫 (初入文坛)
你是理解是对的。通常QPCR扩增的片段较小，50-200bp最佳，而且都讲求快速扩增出结果，所以试剂/试剂盒开发商都开发为二步法了。说若是二步法扩增不好，可以改为三步，其实大部分都没有什么用，还不如更换反应mix或重新设计引物探针有效。
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活到老，学到老
9楼2026-05-20 20:56:10
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