应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】想做半定量RT-PCR,想到几个问题，急求解！忘高手赐教！！
31/1返回列表
查看: 570  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yshwasd

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】想做半定量RT-PCR,想到几个问题，急求解！忘高手赐教！！

本人想做一批大鼠各组织JNK蛋白的半定量RT-PCR，但是组织保存在-80度里时间已数月，未提RNA，不知还能用不？！
做半定量RT费时不？！基本费用如何？!有哪些需提前注意的问题。。。
期待各位，特别是做过RT大侠们给些指点！！
不胜感激呐!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-01-03 22:14:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
reasonspare(金币+3):谢谢分享。 2011-01-04 06:16:54
组织-80问题应该不大，提取RNA后检测看看质量吧
做半定量RT应该不是很贵，提取RNA，合成cDNA，然后跑PCR和电泳就行了，鉴于你是新手，建议你买RNA提取盒子（几百元）和cDNA第一链合成盒子（大概100多），价格我知道的不是很准确，PCR就买Taq酶就是了，电泳买点琼脂糖等药品，很便宜，合成引物一对不超过100元，再就是点耗材，没多少钱，我上面说的都是最小样本量，花多少钱还得看你做多少样本
新手需要注意的就是尽量都买盒子做，不要在研究技术上浪费太多时间，另外就是好好设计引物，时间紧钱宽裕呢就多设计两对，争取一次成功
另外，提醒楼主，半定量RT根本没准，好好研究你的实验目的，如果定量准确很重要，那强烈建议考虑定量PCR

[ Last edited by yujiaping1 on 2011-1-3 at 22:31 ]
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-01-03 22:29:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanliusu

新虫 (小有名气)
★ ★
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~~ 2011-01-04 09:42:25
组织放在-80℃可以提取RNA，如果想省钱就用Trizol提取，操作小心一些，提取的质量也不错，如果不怎么会提的话建议买试剂盒提取。提取完之后测定OD值，然后每个样品取等量的RNA反转录，然后取等体积的cDNA扩PCR。扩的时候两对引物，一对内参，一对目的基因，然后跑电泳检测就可以了。半定量一般做个参考用，费用不是很高，严格的话要做real time PCR，那个费用比较高。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-01-04 09:25:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yshwasd 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 296求调剂 +5 汪！？！ 2026-04-08 5/250 2026-04-09 16:47 by Delta2012
[考研] 化工求调剂！ +29 RichLi_ 2026-04-06 29/1450 2026-04-09 14:09 by Delta2012
[考研] 288求调剂 +15 没有答案_ 2026-04-05 15/750 2026-04-09 10:22 by 5268321
[考研] 308求调剂 +17 墨墨漠 2026-04-06 17/850 2026-04-09 09:25 by 壹往無前
[考研] 求调剂 +15 熊二想上岸 2026-04-04 15/750 2026-04-08 22:52 by 猪会飞
[考研] 一志愿南昌大学，085600，344分求调剂 +11 调剂上岸玘 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:17 by luoyongfeng
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +16 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-05 16/800 2026-04-08 16:02 by luoyongfeng
[考研] 326分，一志愿沪9，求生物学调剂 +4 刘墨墨 2026-04-05 4/200 2026-04-08 06:22 by lijunpoly
[考研] 计算机408｜在校多次国家级竞赛获奖｜申请调剂 +4 东山大白鹅 2026-04-05 4/200 2026-04-08 00:18 by chongya
[考研] 307求调剂 +3 Youth@@ 2026-04-07 3/150 2026-04-07 22:00 by hemengdong
[考研] 292求调剂 +4 lilllllxccc 2026-04-05 5/250 2026-04-07 09:29 by 纺大杨老师
[考研] 312求调剂 +4 LR6 2026-04-06 4/200 2026-04-07 08:42 by jp9609
[考研] 08600生物与医药-327 +9 18755400796 2026-04-05 9/450 2026-04-06 22:35 by 52305043001
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +10 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-04 10/500 2026-04-05 18:51 by 蓝云思雨
[考研] 348求调剂 +6 wukira 2026-04-04 6/300 2026-04-05 18:11 by 猪会飞
[考研] 296求调剂 +3 汪！？！ 2026-04-05 5/250 2026-04-05 17:38 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿上海海洋大学083200食品学硕，求调剂，接受其他专业083200 +4 what张 2026-04-04 5/250 2026-04-05 14:07 by chw1980_0
[考研] 一志愿江南大学085501机械工程专硕326分，本科佳木斯大学 +5 顾若浮生 2026-04-03 9/450 2026-04-05 09:57 by 1753564080
[考研] 338求调剂 +4 zzz，，r 2026-04-03 4/200 2026-04-03 16:39 by lijunpoly
[考研] 303求调剂 +3 一色清羽 2026-04-02 4/200 2026-04-03 10:22 by 蓝云思雨
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭