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LiuMengTan

金虫 (小有名气)

[求助] 求助液相色谱梯度洗脱方法调整的问题 已有1人参与

请教一个HPLC的梯度洗脱问题:缓冲盐是20mmol/L的醋酸铵-醋酸缓冲盐溶液,pH=4.90。
原来的方法
0 min  100% 醋酸铵缓冲盐
2.5 min 100% 醋酸铵缓冲盐
10 min 36% 甲醇  64% 醋酸铵缓冲盐
12.5 min 100% 醋酸铵缓冲盐
15 min 100% 醋酸铵缓冲盐
原来可以检测出五种物质,出峰时间分别是2.33 2.67 5.46 6.45 10.88 min
但是现在我只想检测两种物质(2.67 和5.46两个峰),虽然可以直接跑完这个梯度,但是比较费时间,希望调整后可以节省点分析时间。另外峰谱图后半部分基线漂移比较严重,所以想着调整本方法~
请教一下梯度洗脱的方法应该怎么修改呢?有一个不明白的问题是怎么调整有机相比例可以避免后面不需要的几种物质残留在色谱柱中?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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赈早见琥珀主

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
LiuMengTan: 金币+8, ★★★很有帮助, 非常感谢! 2015-08-03 14:45:29
LiuMengTan: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2015-08-03 14:51:51
1.15min的分析方法还想怎样?120min的方法你说分析时间长,想调短一点,我觉得还是有意义的,15min的方法就算你再怎么优化,10min总要吧,节约这5min意义真不大。
2.后半部是回梯度时间,基线丑,漂移都没关系,反正那边的所有峰都是空白,不带入计算的。
3.如果你非要调整,把10改成7,12.5改成8,15改成12试一试。要注意5.4和6.4这两个峰能不能分开。
铁甲依然在
2楼2015-08-03 14:41:36
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LiuMengTan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 赈早见琥珀主 at 2015-08-03 14:41:36
1.15min的分析方法还想怎样?120min的方法你说分析时间长,想调短一点,我觉得还是有意义的,15min的方法就算你再怎么优化,10min总要吧,节约这5min意义真不大。
2.后半部是回梯度时间,基线丑,漂移都没关系,反 ...

好的,我明白了,只是想问问是否有更好的方法?因为觉得后面的没必要,后半部分柱压高了,基线漂了,又没有目标物质,所以才想问问。听您这么一说好像是多此一举,谢谢哈~
3楼2015-08-03 14:47:03
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赈早见琥珀主

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by LiuMengTan at 2015-08-03 14:47:03
好的,我明白了,只是想问问是否有更好的方法?因为觉得后面的没必要,后半部分柱压高了,基线漂了,又没有目标物质,所以才想问问。听您这么一说好像是多此一举,谢谢哈~...

后半部回梯度是为了保证进下一针的时候有个比较平的基线
铁甲依然在
4楼2015-08-03 14:48:51
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LiuMengTan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 赈早见琥珀主 at 2015-08-03 14:48:51
后半部回梯度是为了保证进下一针的时候有个比较平的基线...

嗯嗯,明白了。那看来前后平衡的时间省不了那就真没必要再调整了。谢谢哈~学习了!
5楼2015-08-03 14:52:45
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da1234mao

铁虫 (著名写手)

等比例走到6分钟就不要了,
0 min  100% 醋酸铵缓冲盐
2.5 min 100% 醋酸铵缓冲盐
6 min 16.8% 甲醇
6楼2015-08-04 08:45:29
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LiuMengTan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by da1234mao at 2015-08-04 08:45:29
等比例走到6分钟就不要了,
0 min  100% 醋酸铵缓冲盐
2.5 min 100% 醋酸铵缓冲盐
6 min 16.8% 甲醇

这样的话我样品里面其他几种物质怎么办?会不会残留在色谱柱里面呢?比较担心影响色谱柱寿命

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2015-08-04 12:13:01
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da1234mao

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by LiuMengTan at 2015-08-04 12:13:01
这样的话我样品里面其他几种物质怎么办?会不会残留在色谱柱里面呢?比较担心影响色谱柱寿命
...

最后来个后运行,冲柱啊
8楼2015-08-04 12:40:58
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LiuMengTan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by da1234mao at 2015-08-04 12:40:58
最后来个后运行,冲柱啊...

冲柱的话设置什么比例,需要多长时间?

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2015-08-04 13:16:08
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