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求助 几根色谱柱柱效突然降低 怀疑是否是仪器问题
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我已经无语了 注册了个账号问问看 用的是东曹G3000xl 硅胶基质的尺寸排阻柱子 7.8*3000mm 做分子筛（sec）检测蛋白质（柱子出厂保存液为0.1mol/l磷酸盐ph6.8+0.1MNa2SO4+0.05%叠氮钠，流速0.5-1.0，最大压力70bar----1029psi） 第一根色谱柱 使用半年 仪器为安捷伦1600 因为检测类别多所以用了一台别的部门淘汰的waters2795专门做sec 柱效逐步下降，2个月后发现柱效不行了，淘汰 方法未变（样品过滤0.45um，流动相为0.1mol/l磷酸盐ph7.0+0.2MNacl+0.05%叠氮钠+1%异丙醇，清洗程序为20%乙腈一个小时，0.05%叠氮钠半小时） 开始用第二根色谱柱 使用10天 约100个样。第十天第一个样品发觉不对，检测柱效突然降低到最初的百分之十几。压力几天来360psi逐步到450psi。查图谱，第10天第一个样品开始严重拖尾，从第5天开始blank（水）8分钟莫名其妙有个很小鼓包，所有样品都有。查说明书，将清洗改为0.5MNa2SO4 ph3.0（最低耐受2.0）2个小时（离子性吸附），20%乙腈 2小时（疏水性吸附），0.05叠氮钠一小时，无用。用8M尿素（最后清洗手段）清洗后用20%乙腈冲一天，检查，无用。半流速反冲，无用。压力一直未超标，柱效回不来。 拿出第一根色谱柱，用尿素冲洗，踏板数回升到原来50%，使用1天，进样完结清洗时堵塞。半流速反冲，压力降低到正常，正过来，一段时间后又堵，反过来20分钟后堵，如是几次放弃（发觉乙腈不干净，可能倾倒液体时将瓶口灰尘冲下）。 更换所有溶剂和溶剂瓶，购买了保护柱。上周一开始使用第三根，这个礼拜二第一个样品柱效又突然降低为最初的10%，从3W降到3千，压力未变。查图谱周一开始5min所有样品及blank出现小鼓包。今天同事将柱子换到安捷伦仪器测试，保护柱压力正常（非常小），色谱柱冲洗半小时后压力逐步上升，接近最大压力，放弃。 waters的仪器被别人淘汰原因是跑梯度洗脱的比例非常不准，我们就用来跑不用梯度的sec。 明天a b c d四个泵都接一下测试流量准确否。 大家看看有什么建议吧 |
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