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风屏玉

新虫 (初入文坛)

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专业: 中药药效物质

[求助] 求助！中药复方液相色谱梯度洗脱条件的优化！已有1人参与

本人刚下实验室做实验，很多东西都不懂，最近要做一个复方的图谱，定性实验，要尽量把峰分离开，这是截的图谱：

色谱图.png
                                                                                                            图1

                                    峰1-没食子酸，2-绿原酸，3-芍药苷，4-滨蒿内酯，5-毛蕊异黄酮，6-姜黄素，7-大黄素

色谱条件如下：
高效液相色谱仪：岛津LC-20A；

色谱柱：SHIMADZUShim-pack VP-ODS （250L×4.6mm），柱温箱为30℃，检测波长为254nm，流速是1ml/min；
进样量：20微升；

流动相：A：0.05%冰乙酸，B：甲醇；
梯度洗脱系统：
  Time(min) A（%）    B（%）
0             90                10
5             90                10
  20             80                20
125          10                90
135          5                95
4号峰与6号峰没分开，该怎么调流动相？期待大神们的指点！谢谢了！

目前处于不断尝试调整调整流动相的过程中，这是下午我做的调整流动相后的图谱：（图谱更不好看了T_T）

图谱2.png
                                                                                                            图 2
梯度洗脱系统：
  Time(min) A（%）    B（%）
0             90                10
5             90                10
  35             70             30
  65             60             40
115          10             90
125             5                95

图1中4号峰约在30%~40%甲醇时间段里，图1该时间段跑15min，为了分开4号峰，把时间拉长变成跑30min了，结果如图2，保留时间55.546处，还是没有分开。最后意外的分开了6号峰，保留时间102.745处。
有没有做过中药复方的前辈？可以传授一下调整流动相的方法或经验吗？谢谢了！

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1楼 2014-05-29 21:49:56

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raulsam1984

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

楼主，你35-65分钟段的水相变化再小一点，或者把这一段的时间再延长一些。如果你以后确定只在这台机器上跑，可以调整一下梯度变化的斜率。

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