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风屏玉

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助!中药复方液相色谱梯度洗脱条件的优化! 已有1人参与

本人刚下实验室做实验,很多东西都不懂, 最近要做一个复方的图谱,定性实验,要尽量把峰分离开,这是截的图谱:
求助!中药复方液相色谱梯度洗脱条件的优化!
色谱图.png
                                                                                                                图1

                                        峰1-没食子酸,2-绿原酸,3-芍药苷,4-滨蒿内酯,5-毛蕊异黄酮,6-姜黄素,7-大黄素

色谱条件如下:
高效液相色谱仪:岛津LC-20A;


色谱柱:SHIMADZUShim-pack VP-ODS (250L×4.6mm),柱温箱为30℃,检测波长为254nm,流速是1ml/min;
进样量:20微升;

流动相:A:0.05%冰乙酸,B:甲醇;
梯度洗脱系统:
  Time(min)    A(%)      B(%)
   0               90                  10
   5               90                 10
  20              80                 20
125            10                  90
135             5                   95
4号峰与6号峰没分开,该怎么调流动相?期待大神们的指点!谢谢了!


目前处于不断尝试调整调整流动相的过程中,这是下午我做的调整流动相后的图谱:(图谱更不好看了T_T)


求助!中药复方液相色谱梯度洗脱条件的优化!-1
图谱2.png
                                                                                                              图 2
梯度洗脱系统:
  Time(min)    A(%)      B(%)  
   0               90                  10
   5               90                 10
  35              70                30
  65              60                40
115             10                90
125              5                   95

图1中4号峰约在30%~40%甲醇时间段里,图1该时间段跑15min,为了分开4号峰,把时间拉长变成跑30min了,结果如图2,保留时间55.546处,还是没有分开。最后意外的分开了6号峰,保留时间102.745处。
有没有做过中药复方的前辈?可以传授一下调整流动相的方法或经验吗?谢谢了!
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raulsam1984

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主,你35-65分钟段的水相变化再小一点,或者把这一段的时间再延长一些。如果你以后确定只在这台机器上跑,可以调整一下梯度变化的斜率。
2楼2014-05-30 09:19:11
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