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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 电泳的marker出问题
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firthzhang

铁虫 (初入文坛)

[求助] 电泳的marker出问题 已有1人参与

最近50X的TAE电泳液用完了，自己按照takara的书上配制了1L，但是跑胶的marker一直如下图所示，救命啊，看过帖子，查过文献，从电泳仪到药品都换了，还是不行，而且以前也配过，没有问题，就是最近的出问题了，之前在跑胶时电压90，电流34ma；现在是电压90时电流就变成了100ma。之后把电泳液稀释到0.5X使用电流下来了，但是marker还是老样子，急救啊，后期都快瘫痪了！！！！跪谢大神

电泳的marker出问题
不同实验室的胶粉.jpg


电泳的marker出问题-1
超纯水配制电泳液，2000marker.jpg


电泳的marker出问题-2
在别人用别家tae自家胶粉跑电泳（7.21）.jpg


电泳的marker出问题-3
换了电泳液新配.jpg


电泳的marker出问题-4
搞不明白了.jpg
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再出不来，我就去死！
1楼 2015-07-23 16:48:52
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976592787

木虫 (正式写手)

国家自然科学基金委员会委员长

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
firthzhang(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-07-24 10:22:49
之前在跑胶时电压90，电流34ma；现在是电压90时电流就变成了100ma。之后把电泳液稀释到0.5X······
你得知道问题出在哪，我们实验室跑胶恒压100v，大概30min就好了，TAE、琼脂糖胶自己配的，marker出来不会像你那样拖好长。还有你跑胶别乱换参数，电泳液1xTAE，检查这些如果都没问题，那是marker不好用了，何不更换marker再试试？
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耻与众草之为伍，何亭亭而独芳！何不为人之所赏兮，深山穷谷委严霜。
2楼2015-07-23 19:36:18
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firthzhang

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 976592787 at 2015-07-23 19:36:18
之前在跑胶时电压90，电流34ma；现在是电压90时电流就变成了100ma。之后把电泳液稀释到0.5X······
你得知道问题出在哪，我们实验室跑胶恒压100v，大概30min就好了，TAE、琼脂糖胶自己配的，marker出来不会像 ...

我换了marker，但是还是一样的结果，我把楼上分子家的都借来用了还是不行，不知道为什么
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再出不来，我就去死！
3楼2015-07-23 20:03:52
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穆远life

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
firthzhang(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-07-24 10:23:01
引用回帖:
3楼: Originally posted by firthzhang at 2015-07-23 20:03:52
我换了marker，但是还是一样的结果，我把楼上分子家的都借来用了还是不行，不知道为什么...

你的maker条带虽然出问题，但是是很有规律的。你的maker的前两条带都基本正常，但是一旦到了第三条以后就随着片段的长度增大而变化增大。也就是说小片段不出问题，而大片段出问题小片段和大片段在胶了的区别是找到问题的门。大片段受到的电场了大，但是随之电场力的增加，阻力增加的程度也就更快，而所有的拖带都是阻力和电场力的相互作用程度超过了一定范围造成的。而阻力的增加程度趋势，和你的带型受影响程度趋势是一致的。电流的改变，电压的影响造成了阻力和电场力的不均衡浮动。大片段分开的慢，在未分开之前带同一种电荷相互作用力时间愈长效果愈差。你打破了新的平衡，电流的变动也就打破力的平衡，片段愈大受影响愈大。个人认为调动电压降电流的效果会比调动电泳液降电流的效果好！在一个你想用的电泳液浓度下调动电压，胶浓度来平衡。个人意见仅供参考。
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4楼2015-07-23 21:02:54
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976592787

木虫 (正式写手)

国家自然科学基金委员会委员长
引用回帖:
3楼: Originally posted by firthzhang at 2015-07-23 20:03:52
我换了marker，但是还是一样的结果，我把楼上分子家的都借来用了还是不行，不知道为什么...

唉，这真是个问题，那很可能是参数问题，问问隔壁实验室他们是咋做的

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耻与众草之为伍，何亭亭而独芳！何不为人之所赏兮，深山穷谷委严霜。
5楼2015-07-23 22:54:54
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firthzhang

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 穆远life at 2015-07-23 21:02:54
你的maker条带虽然出问题，但是是很有规律的。你的maker的前两条带都基本正常，但是一旦到了第三条以后就随着片段的长度增大而变化增大。也就是说小片段不出问题，而大片段出问题小片段和大片段在胶了的区别是找到 ...

你好，你的意思就是电泳向前的电流推力和凝胶分子向后的阻力，两个力失去平衡造成的结果，但是我也试过恒流跑胶，结果还是一样，现在我试试用不同的胶浓度对应电泳液的浓度来做交叉，看看是什么问题，谢谢
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再出不来，我就去死！
6楼2015-07-24 11:03:26
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