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ayiyaya金虫 (小有名气)
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双抗夹心ELISA 重组抗原严重吸附到板上，怎么解？ 已有1人参与
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直接封闭板条+抗原孵育+酶标抗体孵育=显色较高 直接封闭板条+酶标抗体孵育=几乎不显色 个人以为这是因为抗原吸附到板子上了，尝试过用1%BSA和5%脱脂奶封闭，效果都差不多，加抗原孵育的OD依然居高不下。 求高人指教！！！ |
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2楼2015-07-22 11:36:30
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3楼2015-07-22 13:02:54
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4楼2015-07-22 13:04:10
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
ayiyaya: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2015-07-23 14:27:18
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包被抗体-A 抗原-B 酶标抗体-C 棋盘滴定： 1.固定C，横向倍比稀释A，纵向倍比稀释B--确定A的最佳包被浓度(先预估一个酶标抗体的稀释倍数，如果是商品化的酶，根据说明书的数据，选个中间值即可，过量也无所谓) 2.固定A，横向稀释B，纵向稀释C--确定C的最佳工作浓度，毕竟是酶标抗体，很贵的  。你的CBT做法有问题。 这里有本书，你可以回去好好研究研究 http://pan.baidu.com/s/1bnfj1HP 你的验证实验，并没有提到抗原的使用浓度，如果浓度过高，是有非特异性吸附的可能性，即使是已经封闭好的板子也一样，所以，我建议你还是先做CBT，确定两个抗体的使用浓度。ELISA这种实验，不是万能的，被检物的浓度过高过低都会影响ELISA结果的可靠性。 |
5楼2015-07-23 11:51:06
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6楼2015-07-23 14:28:31
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。我看网上的棋盘滴定基本上也是这个套路，不过一般是说做两个抗原浓度，一个强阳，一个弱阳，因为我也不太清楚什么浓度算强阳，什么浓度算弱阳，所以就选了一个过量的Ag浓度。这两天换了封闭液，抗原吸附的问题是解决了，不过棋盘滴定还需要研究一下···7楼2015-07-23 14:35:38
