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ayiyaya

金虫 (小有名气)

[求助] 双抗夹心ELISA灵敏度 已有2人参与

包被抗体+重组抗原+生物素标记抗体+SA-HRP,包被液、抗稀都是通用配方,用了生物素-亲和素系统放大,但是灵敏度依然达不到项目要求,求优化系统的方法!!!
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huajiahu

金虫 (小有名气)

生物素和亲和素标记理论上应该可以达到pg级,若达不到可能标记不成功,所以可以加大标记抗体的量,其次抗体特异性好坏了,用的是双抗体夹心法,就需要一步步排除,所以需要两种抗体都得标记检查两种抗体的特异性或者给抗原标记来检测两种抗体的特异性,有时抗体特异性不好,标记的再好也无卵用

发自小木虫IOS客户端
5楼2015-11-09 13:12:27
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ayiyaya

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by huajiahu at 2015-11-09 13:12:27
生物素和亲和素标记理论上应该可以达到pg级,若达不到可能标记不成功,所以可以加大标记抗体的量,其次抗体特异性好坏了,用的是双抗体夹心法,就需要一步步排除,所以需要两种抗体都得标记检查两种抗体的特异性或者 ...

用HABA法和ELISA(SA包被)检测过标记效果,生物素肯定是标记上了,但是做双抗夹心的时候,灵敏度还不如直接标记HRP。生物素用的是中长臂的,应该也没有问题。现在根本不知道问题出在哪里···
6楼2015-11-10 12:12:10
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rambo_wy

捐助贵宾 (小有名气)

生物素连接抗体的时候,是否有出现蛋白的聚集现象?
18楼2016-02-11 19:17:29
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普通回帖

ayiyaya

金虫 (小有名气)

生物素-亲和素放大系统没效果,求大神指点!!!
2楼2015-09-24 08:44:33
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huajiahu

金虫 (小有名气)

楼主,不知道,你要求的灵敏度是多少?pg级吗?
3楼2015-11-06 16:37:59
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ayiyaya

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by huajiahu at 2015-11-06 16:37:59
楼主,不知道,你要求的灵敏度是多少?pg级吗?

是的,pg级,高值才几十pg···
4楼2015-11-08 22:52:37
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huajiahu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ayiyaya at 2015-11-10 12:12:10
用HABA法和ELISA(SA包被)检测过标记效果,生物素肯定是标记上了,但是做双抗夹心的时候,灵敏度还不如直接标记HRP。生物素用的是中长臂的,应该也没有问题。现在根本不知道问题出在哪里···...

灵敏度不如hrp我觉得应该不会啊,sa与hrp的标记有没有问题啊?

发自小木虫IOS客户端
7楼2015-11-10 12:25:53
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ayiyaya

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by huajiahu at 2015-11-10 12:25:53
灵敏度不如hrp我觉得应该不会啊,sa与hrp的标记有没有问题啊?
...

标记应该没有问题的,HRP标记用的高碘酸钠法,生物素是按照thermo的说明书做的···
生物素标记抗体也能做,就是显色效果不大好···
8楼2015-11-10 19:20:25
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feiyue122

金虫 (正式写手)

首先,你要确定你的两个抗体的配对效果怎么样,如果配对效果不好,你标记在好,灵敏度也不会搞的,然后检查配对之后,两个抗体能否反应,因为标记没有控制好,抗体的效应可能会下降的
9楼2015-12-14 10:53:31
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ayiyaya

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by feiyue122 at 2015-12-14 10:53:31
首先,你要确定你的两个抗体的配对效果怎么样,如果配对效果不好,你标记在好,灵敏度也不会搞的,然后检查配对之后,两个抗体能否反应,因为标记没有控制好,抗体的效应可能会下降的

抗体的配对效果还行,现在的问题主要是生物素-亲和素放大系统没有效果,同样的一对抗体,标记生物素的灵敏度还不如直接标记HRP...
10楼2015-12-14 13:41:21
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