| 查看: 1360 | 回复: 1 | ||
[求助]
求前辈分析原因关于间接ELISA和双抗夹心ELISA实验的问题
|
|
目的是用ELISA检测某种蛋白的含量，间接法步骤 1.板在紫外照射90分钟 2.样品包被:将样品中总蛋白浓度稀释到0.055mg/ml ，0.0275mg/ML ，0.011mg/ML ，0.0055mg/ml ，0.00275mg/ML(用CBS稀释) 4度冰箱过夜 3.在卫生纸上拍掉昨天加的样品 4.每孔加100微PBST 摇床放置5分钟后拍掉清洗液 重复3次 5.每孔加2%BSA 100微 37度封闭1小时 6.在卫生纸上拍掉2%BSA 7.每孔加100微PBST 摇床放置5分钟后拍掉清洗液 重复3次 8.每孔加一抗 100微 （用PBS稀释10000倍） 37度反应1小时 9.在卫生纸上拍掉一抗 10 .每孔加100微PBST 摇床放置5分钟后拍掉清洗液 重复3次 11.每孔加二抗 100微 （用PBS稀释10000倍） 37度反应1小时 12.在卫生纸上拍掉二抗 13 .每孔加100微PBST 摇床放置5分钟后拍掉清洗液 重复3次 14.加pnpp ，每孔100微，37度显色30min 15，加终止液 2M/L NaOH 已经做过两次了但是还是不成线性，显色也不够明显 抗原为细胞中某种蛋白，样品为细胞裂解后的全蛋白，所测浓度也是全蛋白的浓度，不知是样品太稀了还是一抗还是二抗浓度太稀了，裂解方法为37度和零下80度反复冻融 本人本科生，以前也没有做过这类的，希望前辈帮忙分析下原因，还有OD值大概在什么范围内比较合适 |
回复此楼» 猜你喜欢
莫那利珠单抗阻断NKG2A/HLA-E抑制通路 | Biochempartner
已经有0人回复
-
GSPT1口服分子胶降解剂MRT-2359 | Biochempartner
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有181人回复
-
碳青霉烯类抗生素为何需联用西司他丁钠？ | Biochempartner
已经有0人回复
-
源自蕨类植物的抗炎美白活性分子去甲氧基荚果蕨素 | Biochempartner
已经有0人回复
-
肠道里的"代谢开关"：Fexaramine用肠道限制性重新定义 FXR 激动剂
已经有0人回复
-
DMXAA：从血管破坏剂到STING通路研究的关键工具分子 | Biochempartner
已经有0人回复
-
靶向PD-L1的人源化单克隆抗体阿特珠单抗
已经有0人回复
-
"探针之父"(+)-JQ-1如何改变表观遗传研究 | Biochempartner
已经有0人回复
-
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 小鼠ELISA和流式细胞实验问题求助
已经有8人回复
- 双抗体夹心ELISA的梯度浓度标准品实验结果确无梯度变化，真心求大家帮忙分析原因！
已经有23人回复
- 双抗体夹心ELISA，阳性孔，样品孔和阴性对照全部不显色，怎么回事
已经有12人回复
- 双抗夹心ELISA 空白值偏高
已经有3人回复
- 双抗体夹心ELISA，阴性值很高，怎么回事呢
已经有41人回复
- 【求助/交流】双抗体夹心ELISA的空白孔该怎么设置？
已经有6人回复
- 【求助/交流】间接竞争ELISA药物不溶于水的问题
已经有7人回复
2楼2015-11-08 14:57:41