| 查看: 1432 | 回复: 1 | ||
[求助]
求前辈分析原因关于间接ELISA和双抗夹心ELISA实验的问题
|
|
目的是用ELISA检测某种蛋白的含量，间接法步骤 1.板在紫外照射90分钟 2.样品包被:将样品中总蛋白浓度稀释到0.055mg/ml ，0.0275mg/ML ，0.011mg/ML ，0.0055mg/ml ，0.00275mg/ML(用CBS稀释) 4度冰箱过夜 3.在卫生纸上拍掉昨天加的样品 4.每孔加100微PBST 摇床放置5分钟后拍掉清洗液 重复3次 5.每孔加2%BSA 100微 37度封闭1小时 6.在卫生纸上拍掉2%BSA 7.每孔加100微PBST 摇床放置5分钟后拍掉清洗液 重复3次 8.每孔加一抗 100微 （用PBS稀释10000倍） 37度反应1小时 9.在卫生纸上拍掉一抗 10 .每孔加100微PBST 摇床放置5分钟后拍掉清洗液 重复3次 11.每孔加二抗 100微 （用PBS稀释10000倍） 37度反应1小时 12.在卫生纸上拍掉二抗 13 .每孔加100微PBST 摇床放置5分钟后拍掉清洗液 重复3次 14.加pnpp ，每孔100微，37度显色30min 15，加终止液 2M/L NaOH 已经做过两次了但是还是不成线性，显色也不够明显 抗原为细胞中某种蛋白，样品为细胞裂解后的全蛋白，所测浓度也是全蛋白的浓度，不知是样品太稀了还是一抗还是二抗浓度太稀了，裂解方法为37度和零下80度反复冻融 本人本科生，以前也没有做过这类的，希望前辈帮忙分析下原因，还有OD值大概在什么范围内比较合适 |
回复此楼» 猜你喜欢
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有173人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 小鼠ELISA和流式细胞实验问题求助
已经有8人回复
- 双抗体夹心ELISA的梯度浓度标准品实验结果确无梯度变化，真心求大家帮忙分析原因！
已经有23人回复
- 双抗体夹心ELISA，阳性孔，样品孔和阴性对照全部不显色，怎么回事
已经有12人回复
- 双抗夹心ELISA 空白值偏高
已经有3人回复
- 双抗体夹心ELISA，阴性值很高，怎么回事呢
已经有41人回复
- 【求助/交流】双抗体夹心ELISA的空白孔该怎么设置？
已经有6人回复
- 【求助/交流】间接竞争ELISA药物不溶于水的问题
已经有7人回复
2楼2015-11-08 14:57:41
