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求前辈分析原因关于间接ELISA和双抗夹心ELISA实验的问题
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目的是用ELISA检测某种蛋白的含量，间接法步骤 1.板在紫外照射90分钟 2.样品包被:将样品中总蛋白浓度稀释到0.055mg/ml ，0.0275mg/ML ，0.011mg/ML ，0.0055mg/ml ，0.00275mg/ML(用CBS稀释) 4度冰箱过夜 3.在卫生纸上拍掉昨天加的样品 4.每孔加100微PBST 摇床放置5分钟后拍掉清洗液 重复3次 5.每孔加2%BSA 100微 37度封闭1小时 6.在卫生纸上拍掉2%BSA 7.每孔加100微PBST 摇床放置5分钟后拍掉清洗液 重复3次 8.每孔加一抗 100微 （用PBS稀释10000倍） 37度反应1小时 9.在卫生纸上拍掉一抗 10 .每孔加100微PBST 摇床放置5分钟后拍掉清洗液 重复3次 11.每孔加二抗 100微 （用PBS稀释10000倍） 37度反应1小时 12.在卫生纸上拍掉二抗 13 .每孔加100微PBST 摇床放置5分钟后拍掉清洗液 重复3次 14.加pnpp ，每孔100微，37度显色30min 15，加终止液 2M/L NaOH 已经做过两次了但是还是不成线性，显色也不够明显 抗原为细胞中某种蛋白，样品为细胞裂解后的全蛋白，所测浓度也是全蛋白的浓度，不知是样品太稀了还是一抗还是二抗浓度太稀了，裂解方法为37度和零下80度反复冻融 本人本科生，以前也没有做过这类的，希望前辈帮忙分析下原因，还有OD值大概在什么范围内比较合适 |
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2楼2015-11-08 14:57:41