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天使的茶

铁虫 (小有名气)

[求助] 请问加了loading buffer的产物还能进行二次pcr吗 已有8人参与

本来想二次pcr的,但是不小心全部产物都加loading buffer了,模版也全没了,请问加了loading buffer的产物还能进行二次pcr吗
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dxh86412

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-22 22:50:52
跑下胶,纯化下,二次pcr最总要的是模板一定要稀释,至少200倍~
2楼2015-06-22 02:11:34
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duan1987

铁杆木虫 (著名写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-22 22:51:13
可以的,买的mix不都是带loading buffer的么?
相信爱的年纪,没能唱给你的歌曲,让我一生中常常追忆…
4楼2015-06-22 16:14:27
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txing

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
loading buffer 一般是溴酚蓝,加进去PCR是没有问题的
7楼2015-06-23 15:29:16
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dxh86412

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-24 22:52:14
最好跑下胶,纯化下。其实按理说,loading buffer对PCR是没有抑制作用的,二次pcr的话,一定要稀释模板,最少200倍~
3楼2015-06-22 02:14:29
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wuwenmei

新虫 (小有名气)

没做过,不过你可以试试嘛、、
下雨天就算没有伞,我也要学会努力奔跑!
5楼2015-06-22 17:51:40
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siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-24 22:52:39
Loading buffer 一般10*的都带EDTA或者SDS这种就不能再用了,只能跑胶回收片段来做。6*的和MIX里面的loading buffer不含这两种成分,所以可以直接做,但最好还是建议胶回收之后再做。
此座可言轻社稷,江山万里起风尘。
6楼2015-06-23 14:28:59
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键盘上的脚丫

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by txing at 2015-06-23 15:29:16
loading buffer 一般是溴酚蓝,加进去PCR是没有问题的

是溴酚蓝,但是里面不是也有甘油吗? 会终止反应的。
8楼2015-06-23 22:22:41
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woshiyeda

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以的,跑完PCR再胶回收,应该门没问题
Nevergiveup
9楼2015-06-24 21:28:44
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人车

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以先胶回收一下 之后再做吧 这样稳妥一点
10楼2015-06-25 08:37:10
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-06-23 14:28:59
Loading buffer 一般10*的都带EDTA或者SDS这种就不能再用了,只能跑胶回收片段来做。6*的和MIX里面的loading buffer不含这两种成分,所以可以直接做,但最好还是建议胶回收之后再做。


有这么一说??

正经配的或者买的loading buffer都有EDTA,SDS有没有不见得。

再说,为什么要胶回收?最简单的酚抽醇沉一下就完事,或者直接过一个PCR回收柱子。

其实,一点点EDTA没有太大影响,特别是模板给很少的时候。
11楼2015-06-25 10:04:12
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 键盘上的脚丫 at 2015-06-23 22:22:41
是溴酚蓝,但是里面不是也有甘油吗? 会终止反应的。...



Taq酶里还有50%的甘油呢?
12楼2015-06-25 10:06:26
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以割胶回收纯化一下,再做2次PCR啦。
13楼2015-06-25 21:28:54
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