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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请问加了loading buffer的产物还能进行二次pcr吗
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天使的茶

铁虫 (小有名气)

[求助] 请问加了loading buffer的产物还能进行二次pcr吗 已有8人参与

本来想二次pcr的，但是不小心全部产物都加loading buffer了，模版也全没了，请问加了loading buffer的产物还能进行二次pcr吗
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无
1楼 2015-06-21 20:23:50
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

dxh86412

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-22 22:50:52
跑下胶，纯化下，二次pcr最总要的是模板一定要稀释，至少200倍~
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2楼2015-06-22 02:11:34
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duan1987

铁杆木虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-22 22:51:13
可以的，买的mix不都是带loading buffer的么？
赞一下(2人) 回复此楼
相信爱的年纪，没能唱给你的歌曲，让我一生中常常追忆…
4楼2015-06-22 16:14:27
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txing

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
loading buffer 一般是溴酚蓝，加进去PCR是没有问题的
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7楼2015-06-23 15:29:16
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dxh86412

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-24 22:52:14
最好跑下胶，纯化下。其实按理说，loading buffer对PCR是没有抑制作用的，二次pcr的话，一定要稀释模板，最少200倍~
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3楼2015-06-22 02:14:29
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wuwenmei

新虫 (小有名气)
没做过，不过你可以试试嘛、、
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下雨天就算没有伞，我也要学会努力奔跑！
5楼2015-06-22 17:51:40
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siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-24 22:52:39
Loading buffer 一般10*的都带EDTA或者SDS这种就不能再用了，只能跑胶回收片段来做。6*的和MIX里面的loading buffer不含这两种成分，所以可以直接做，但最好还是建议胶回收之后再做。
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
6楼2015-06-23 14:28:59
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键盘上的脚丫

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by txing at 2015-06-23 15:29:16
loading buffer 一般是溴酚蓝，加进去PCR是没有问题的

是溴酚蓝，但是里面不是也有甘油吗？ 会终止反应的。
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8楼2015-06-23 22:22:41
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woshiyeda

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以的，跑完PCR再胶回收，应该门没问题
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Nevergiveup
9楼2015-06-24 21:28:44
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人车

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以先胶回收一下 之后再做吧 这样稳妥一点
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10楼2015-06-25 08:37:10
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-06-23 14:28:59
Loading buffer 一般10*的都带EDTA或者SDS这种就不能再用了，只能跑胶回收片段来做。6*的和MIX里面的loading buffer不含这两种成分，所以可以直接做，但最好还是建议胶回收之后再做。


有这么一说？？

正经配的或者买的loading buffer都有EDTA，SDS有没有不见得。

再说，为什么要胶回收？最简单的酚抽醇沉一下就完事，或者直接过一个PCR回收柱子。

其实，一点点EDTA没有太大影响，特别是模板给很少的时候。
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11楼2015-06-25 10:04:12
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 键盘上的脚丫 at 2015-06-23 22:22:41
是溴酚蓝，但是里面不是也有甘油吗？ 会终止反应的。...



Taq酶里还有50%的甘油呢？
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12楼2015-06-25 10:06:26
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以割胶回收纯化一下，再做2次PCR啦。
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13楼2015-06-25 21:28:54
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