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天使的茶

铁虫 (小有名气)

[求助] 请问加了loading buffer的产物还能进行二次pcr吗 已有8人参与

本来想二次pcr的,但是不小心全部产物都加loading buffer了,模版也全没了,请问加了loading buffer的产物还能进行二次pcr吗
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-06-23 14:28:59
Loading buffer 一般10*的都带EDTA或者SDS这种就不能再用了,只能跑胶回收片段来做。6*的和MIX里面的loading buffer不含这两种成分,所以可以直接做,但最好还是建议胶回收之后再做。


有这么一说??

正经配的或者买的loading buffer都有EDTA,SDS有没有不见得。

再说,为什么要胶回收?最简单的酚抽醇沉一下就完事,或者直接过一个PCR回收柱子。

其实,一点点EDTA没有太大影响,特别是模板给很少的时候。
11楼2015-06-25 10:04:12
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dxh86412

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-22 22:50:52
跑下胶,纯化下,二次pcr最总要的是模板一定要稀释,至少200倍~
2楼2015-06-22 02:11:34
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dxh86412

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-24 22:52:14
最好跑下胶,纯化下。其实按理说,loading buffer对PCR是没有抑制作用的,二次pcr的话,一定要稀释模板,最少200倍~
3楼2015-06-22 02:14:29
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duan1987

铁杆木虫 (著名写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-22 22:51:13
可以的,买的mix不都是带loading buffer的么?
相信爱的年纪,没能唱给你的歌曲,让我一生中常常追忆…
4楼2015-06-22 16:14:27
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