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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请问加了loading buffer的产物还能进行二次pcr吗
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-06-23 14:28:59
Loading buffer 一般10*的都带EDTA或者SDS这种就不能再用了，只能跑胶回收片段来做。6*的和MIX里面的loading buffer不含这两种成分，所以可以直接做，但最好还是建议胶回收之后再做。


有这么一说？？

正经配的或者买的loading buffer都有EDTA，SDS有没有不见得。

再说，为什么要胶回收？最简单的酚抽醇沉一下就完事，或者直接过一个PCR回收柱子。

其实，一点点EDTA没有太大影响，特别是模板给很少的时候。
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11楼2015-06-25 10:04:12
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 键盘上的脚丫 at 2015-06-23 22:22:41
是溴酚蓝，但是里面不是也有甘油吗？ 会终止反应的。...



Taq酶里还有50%的甘油呢？
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12楼2015-06-25 10:06:26
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以割胶回收纯化一下，再做2次PCR啦。
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13楼2015-06-25 21:28:54
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Huobol

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

肯定能行，买的Mix里不就带有Loading Buffer吗。我做RACE用的也是Mix，二轮PCR时就把一轮产物稀释100或200倍做模板，完全没问题，照样P出亮带，测序也是对的。
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让羽毛再飞一会儿
14楼2015-09-10 17:36:29
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