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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 请问，高盐下为什么蛋白质与DNA难以结合？
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mabo8686

铁虫 (初入文坛)

[求助] 请问，高盐下为什么蛋白质与DNA难以结合？ 已有2人参与

求助各位，本人在做一个DNA结合蛋白，此蛋白嗜盐，需要盐浓度高于300mM NaCl才能保持稳定，现在想做与DNA结合的一个实验。但是如此高的盐浓度下，蛋白与DNA无法结合。
请问各位高手有什么办法呢？

另外，弱弱地问一下，蛋白与DNA为啥在高盐下难以结合呢？哪位高手给一点理论解释。

多谢。
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leavingtown
1楼 2015-06-17 20:35:43
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quarter123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-19 20:45:47
DNA带有负电荷，蛋白质表面若也是负电，不结合

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2楼2015-06-17 23:58:35
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mabo8686

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by quarter123 at 2015-06-17 23:58:35
DNA带有负电荷，蛋白质表面若也是负电，不结合

多谢回复，但是我的蛋白等电点在9点多，中性PH左右会带正电。
不知道是不是因为高盐下离子强度比较大，中和了DNA和蛋白之间的静电力？
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leavingtown
3楼2015-06-18 10:06:00
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quarter123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by mabo8686 at 2015-06-18 10:06:00
多谢回复，但是我的蛋白等电点在9点多，中性PH左右会带正电。
不知道是不是因为高盐下离子强度比较大，中和了DNA和蛋白之间的静电力？...

高盐情况下离子容易结合DNA和蛋白，中和点电荷完成无法结合，即使结合了也不稳定，我觉得应该在蛋白稳定性上入手，比如加上一些标签，proteinA,或者对蛋白进行截短，截去一些对结合没有影响但是又不形成稳定二级结构的区域

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4楼2015-06-18 12:51:24
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ccandcc

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mabo8686: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-06-19 12:33:06
在高盐高离子强度的条件下，你的化合物外面包着厚厚的一层溶液盐离子。
导致你的蛋白和dna很难结合！

原理差不多就这样，你要记住的结论就是 在高盐高离子强度的条件下，靠静电作用的结合反应很难发生。
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5楼2015-06-19 08:19:03
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mabo8686

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by quarter123 at 2015-06-18 12:51:24
高盐情况下离子容易结合DNA和蛋白，中和点电荷完成无法结合，即使结合了也不稳定，我觉得应该在蛋白稳定性上入手，比如加上一些标签，proteinA,或者对蛋白进行截短，截去一些对结合没有影响但是又不形成稳定二级结 ...

多谢建议
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leavingtown
6楼2015-06-19 12:31:57
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gundogan

金虫 (小有名气)
可以做蛋白改性，用亲和素修饰，DNA的5‘端用生物素修饰
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7楼2015-06-26 08:49:54
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