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mabo8686

铁虫 (初入文坛)

[求助] 请问,高盐下为什么蛋白质与DNA难以结合? 已有2人参与

求助各位,本人在做一个DNA结合蛋白,此蛋白嗜盐,需要盐浓度高于300mM NaCl才能保持稳定,现在想做与DNA结合的一个实验。但是如此高的盐浓度下,蛋白与DNA无法结合。
请问各位高手有什么办法呢?

另外,弱弱地问一下,蛋白与DNA为啥在高盐下难以结合呢?哪位高手给一点理论解释。

多谢。
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leavingtown
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quarter123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-19 20:45:47
DNA带有负电荷,蛋白质表面若也是负电,不结合

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-06-17 23:58:35
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mabo8686

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by quarter123 at 2015-06-17 23:58:35
DNA带有负电荷,蛋白质表面若也是负电,不结合

多谢回复,但是我的蛋白等电点在9点多,中性PH左右会带正电。
不知道是不是因为高盐下离子强度比较大,中和了DNA和蛋白之间的静电力?
leavingtown
3楼2015-06-18 10:06:00
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quarter123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by mabo8686 at 2015-06-18 10:06:00
多谢回复,但是我的蛋白等电点在9点多,中性PH左右会带正电。
不知道是不是因为高盐下离子强度比较大,中和了DNA和蛋白之间的静电力?...

高盐情况下离子容易结合DNA和蛋白,中和点电荷完成无法结合,即使结合了也不稳定,我觉得应该在蛋白稳定性上入手,比如加上一些标签,proteinA,或者对蛋白进行截短,截去一些对结合没有影响但是又不形成稳定二级结构的区域

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-06-18 12:51:24
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ccandcc

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mabo8686: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-06-19 12:33:06
在高盐高离子强度的条件下,你的化合物外面包着厚厚的一层溶液盐离子。
导致你的蛋白和dna很难结合!

原理差不多就这样,你要记住的结论就是 在高盐高离子强度的条件下,靠静电作用的结合反应很难发生。
5楼2015-06-19 08:19:03
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mabo8686

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by quarter123 at 2015-06-18 12:51:24
高盐情况下离子容易结合DNA和蛋白,中和点电荷完成无法结合,即使结合了也不稳定,我觉得应该在蛋白稳定性上入手,比如加上一些标签,proteinA,或者对蛋白进行截短,截去一些对结合没有影响但是又不形成稳定二级结 ...

多谢建议
leavingtown
6楼2015-06-19 12:31:57
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gundogan

金虫 (小有名气)

可以做蛋白改性,用亲和素修饰,DNA的5‘端用生物素修饰
7楼2015-06-26 08:49:54
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