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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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leena0114

金虫 (初入文坛)

[求助] DGGE条带为什么稀少不够清晰？ 已有3人参与

各位虫友们，帮我看看我做的DGGE，为什么跑出来的条带稀少而暗淡?第一张图是一个月前做的dgge，条带多而清晰，跑胶挺成功，但后续克隆没成功所以这次重做的，可是这次的dgge，与上次同一批DNA样品，PCR体系和条件也一样，为什么跑出的条带比上月的少多了呢？也没第一次的清晰，这是怎么回事。本人是分子生物学新手，求帮忙！第三张图是这次dgge前PCR的琼脂糖条带，条带也不那么清晰，而是有点模糊，且上下有些宽度，这是怎么造成的，与这次DGGE失败有联系吗？

DGGE条带为什么稀少不够清晰？
1.jpg 第一次DGGE，较成功


DGGE条带为什么稀少不够清晰？-1
2.jpg  第二次DGGE 条带暗淡稀少，中间两条带太亮


DGGE条带为什么稀少不够清晰？-2
3.jpg 第二次DGGE前的PCR
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1楼 2015-06-16 19:54:43
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荒野的呼唤

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
前面两张不懂，后面第三张图是不是有引物二聚体啊？你把PCR体系里的引物减少试试。顺便问一下，DGGE是用的什么染色？感觉第一张好清晰
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2楼2015-06-18 16:04:10
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Tingting-531

新虫 (初入文坛)
你好，请问你跑DGGE用的MARK是什么MARK？
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3楼2015-07-07 15:19:25
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leena0114

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 荒野的呼唤 at 2015-06-18 16:04:10
前面两张不懂，后面第三张图是不是有引物二聚体啊？你把PCR体系里的引物减少试试。顺便问一下，DGGE是用的什么染色？感觉第一张好清晰

PCR体系、加的引物体积每次都一样，为什么第一次的DGGE就能跑的好，这两次用的同一批模板呀。我用EB染色
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4楼2015-07-08 16:14:01
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leena0114

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Tingting-531 at 2015-07-07 15:19:25
你好，请问你跑DGGE用的MARK是什么MARK？

DL2000
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5楼2015-07-08 16:14:18
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小情绪你不懂

金虫 (小有名气)
请教楼主、我PCR后跑琼脂糖电泳有DNA条带且正常、为什么跑DGGE胶没有任何条带
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6楼2015-07-27 17:58:05
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tianrenmao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小情绪你不懂 at 2015-07-27 17:58:05
请教楼主、我PCR后跑琼脂糖电泳有DNA条带且正常、为什么跑DGGE胶没有任何条带

变性剂浓度范围调宽一点，

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7楼2015-07-27 20:49:53
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tianrenmao

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果所有条件都没变，目测是你的模板DNA时间长了降解了，只剩下dominant那些模板，跑一下模板DNA看一下，

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8楼2015-07-27 20:52:11
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小情绪你不懂

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by tianrenmao at 2015-07-27 20:49:53
变性剂浓度范围调宽一点，
...

43%--58%的变性剂、会不会是因为提出的DNA量少？
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9楼2015-07-28 09:58:59
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tianrenmao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 小情绪你不懂 at 2015-07-28 09:58:59
43%--58%的变性剂、会不会是因为提出的DNA量少？...

这个范围忒小了吧，我们那时候都用20-60%

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10楼2015-07-28 10:56:06
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