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胰蛋白酶裂解蛋白的条件？ 已有2人参与
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| 请教 胰蛋白酶裂解蛋白的反应条件，试了很多条件，效率都比较低？总是感觉酶的活力比较低，用的是上海生工的胰蛋白酶1:250，或者有什么这个方面参考文献的 |
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luwei13566
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【答案】应助回帖
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1.不同来源的胰蛋白酶最适pH、最适温度、稳定性、金属离子差异都很大的。LZ可以先和生工联系搞清楚这个酶是从哪个来源得到的，然后再查找相关文献或者说明书。 2.如果怀疑买到的胰蛋白酶的活性。可以在一定温度和pH下，以N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯为底物检测253nm下吸光度的差异换算成酶活来评价一下你买的这个酶的效价和商品目录上贴的是否在一个数量级。 3. 一般蛋白酶水解的效果在不同的底物中差异也是非常大的。可能你的目标蛋白确实不好处理，或者是目标蛋白上的切割位点包裹在疏水核心里面无法水解掉，不知道LZ是做什么的，对你的蛋白样品煮沸10分钟再用胰蛋白酶消解应该会有不错的效果。 |
2楼2015-06-06 03:36:02
shenglin01
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