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89509306

银虫 (小有名气)

[交流] 求交流:细胞裂解液 或胰蛋白酶液中加EDTA的作用?已有5人参与

查的资料 说细胞裂解液中加入EDTA 螯合金属离子,可使金属蛋白酶失活,抑制蛋白的降解。
但消化细胞时,常在胰蛋白酶中加EDTA,  可加速细胞消化。但胰蛋白酶也是钙离子金属蛋白酶,加入EDTA为什么不会影响?

另外百度对胰蛋白酶的介绍中,提到“。。。Ca2+对酶活性有稳定作用;..." 但下文又提到“因 Ca2+ 、 Mg2+ 和血清、蛋白质可降低胰酶的活性。。。,”。这不前后矛盾吗?
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0620602

铜虫 (初入文坛)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-03-26 22:31:54
细胞贴壁发挥作用的蛋白需要Ca2+、Mg2+等离子,加入EDTA对金属阳离子进行螯合有利于细胞的消化。
关于胰酶,应该也是Ca2+、Mg2+的存在抑制其酶活
2楼2015-03-26 15:58:50
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89509306

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 0620602 at 2015-03-26 15:58:50
细胞贴壁发挥作用的蛋白需要Ca2+、Mg2+等离子,加入EDTA对金属阳离子进行螯合有利于细胞的消化。
关于胰酶,应该也是Ca2+、Mg2+的存在抑制其酶活

网上说Ca2+、Mg2+抑制胰蛋白酶。但是胰蛋白酶也是钙离子蛋白酶,钙离子在酶分子内部,是其活性中心。 为什么游离的钙离子会抑制它的活性呢?   EDTA可以螯合金属离子,不会对胰蛋白分子内的钙离子产生作用吗?  或者可能,EDTA无法螯合酶分子内部的钙离子。 但是也有介绍说其他的金属蛋白酶,其分子内的钙离子也可以被EDTA结合的。
3楼2015-03-26 16:54:43
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雪坳

新虫 (初入文坛)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-03-28 23:32:53
EDTA是是像个手掌一样的金属螯合剂,它可以牢牢抓住金属离子。而胰蛋白酶也是可以理解为一个爪子抓住了钙离子,因此手掌无法再去抓住爪子捕获的钙离子了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
天道酬勤
4楼2015-03-28 17:07:19
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SAM001

金虫 (小有名气)

sh
5楼2015-03-28 22:08:43
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SAM001

金虫 (小有名气)


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EDTA加的量比较少,可能是用于减少溶液中的离子,提高酶消化的活性
6楼2015-03-28 22:09:58
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z631535213

木虫 (正式写手)


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LZ你这个问题解决了吗?能否告知下
7楼2015-04-22 17:21:45
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89509306

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by z631535213 at 2015-04-22 17:21:45
LZ你这个问题解决了吗?能否告知下

还不是很清楚其中的机制..............
8楼2015-06-02 16:17:51
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89509306

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 雪坳 at 2015-03-28 17:07:19
EDTA是是像个手掌一样的金属螯合剂,它可以牢牢抓住金属离子。而胰蛋白酶也是可以理解为一个爪子抓住了钙离子,因此手掌无法再去抓住爪子捕获的钙离子了

那做co-IP或其他实验时 细胞裂解液中加EDTA是什么作用呢?
9楼2015-06-02 16:23:13
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13170012081

新虫 (初入文坛)


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胰酶是钙离子酶,钙在其内部!外在的钙离子则会降低胰酶的活性!
10楼2015-10-14 02:09:32
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