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jianglay新虫 (初入文坛)
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[求助]
肥大细胞类胰蛋白酶测定
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参考了好几篇文献方法都是这么写的： "类胰蛋白酶活力测定采用专性底物α-苯甲酰-DL-精氨酸-P-硝基苯胺（BAPAN)。 以20g/l溶于二甲基亚砜，取 加入40μL含待测液的0.1mol/l反应缓冲液1.5ml中，反应缓冲液为Tris-HCl（pH7.4 ）。 30℃反应20min后，加入0.5ml30%（体积体积）乙酸终止反应，在405nm测光吸收值。以反应缓冲液做参比调零。相对酶活力单位采用下述公式计算：（A待测 /A标准） 。配制胰蛋白酶标准溶液，做标准曲线。" 问题是我想把细胞放置在96孔培养板中进行培养，通过加入肥大细胞脱颗粒剂C48/80来使细胞脱颗粒释放类胰蛋白酶，我的操作是，50微升细胞PBS悬液加入96孔板后，加入不同浓度的C48/80刺激物50微升（培养液溶）孵育1小时候，加入BAPAN，30分钟后加入乙酸，但是实验结果吸光值不变，感到很诧异，跪求解答~ |
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jianglay
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这个不是很在行，不过还是祝愿有人帮你指点
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