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jianglay

新虫 (初入文坛)

[求助] 肥大细胞类胰蛋白酶测定

参考了好几篇文献方法都是这么写的:
"类胰蛋白酶活力测定采用专性底物α-苯甲酰-DL-精氨酸-P-硝基苯胺(BAPAN)。 以20g/l溶于二甲基亚砜,取 加入40μL含待测液的0.1mol/l反应缓冲液1.5ml中,反应缓冲液为Tris-HCl(pH7.4 )。 30℃反应20min后,加入0.5ml30%(体积体积)乙酸终止反应,在405nm测光吸收值。以反应缓冲液做参比调零。相对酶活力单位采用下述公式计算:(A待测 /A标准) 。配制胰蛋白酶标准溶液,做标准曲线。"
问题是我想把细胞放置在96孔培养板中进行培养,通过加入肥大细胞脱颗粒剂C48/80来使细胞脱颗粒释放类胰蛋白酶,我的操作是,50微升细胞PBS悬液加入96孔板后,加入不同浓度的C48/80刺激物50微升(培养液溶)孵育1小时候,加入BAPAN,30分钟后加入乙酸,但是实验结果吸光值不变,感到很诧异,跪求解答~
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喔列打击哇刚大木达
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暗夜之子

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

而且貌似你那个ph也太低了
5楼2013-04-29 12:36:28
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jianglay

新虫 (初入文坛)

没人啊,跪求啊啊啊
喔列打击哇刚大木达
2楼2012-06-19 10:14:48
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BQ20110430

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 应助指数+1, 不应助的话,不要点应助哦,有刷应助指数的嫌疑哦 2012-06-19 13:51:30
jianglay: 金币+1, 谢谢 2012-06-29 21:00:08
这个不是很在行,不过还是祝愿有人帮你指点
3楼2012-06-19 10:23:48
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暗夜之子

新虫 (初入文坛)

反应体系需要摸索很长时间 我刚开始也测不出来 试试在底物浓度上想些办法
4楼2013-04-29 12:35:42
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