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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 如果目的片段过于短小克隆到PET载体上然后在BL21中表达，能表达出我的目的蛋白吗？
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风雪云

木虫 (小有名气)

[交流] 如果目的片段过于短小克隆到PET载体上然后在BL21中表达，能表达出我的目的蛋白吗？

如题，我想做个克隆，但是目的片段表达出来的蛋白（肽段）只有十几个氨基酸,假如我把这个目的片段克隆到PET载体上然后在BL21中表达，能表达出我的目的蛋白吗？如果能表达出来会不会降解呢？这么短是不是让公司合成比较靠谱啊？求教啊！
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1楼 2015-05-26 22:16:05
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a13515517892

木虫 (小有名气)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
风雪云: 金币+1 2015-05-27 23:50:05
让公司来做合成把，简单
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2楼2015-05-27 08:47:23
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erland21411

铁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
风雪云: 金币+1 2015-05-27 23:50:19
十几个氨基酸还是合成吧，你做原核表达的话这个太小了很难区分和纯化的，不如直接合成的效果好。

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3楼2015-05-27 09:08:54
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风雪云

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by erland21411 at 2015-05-27 09:08:54
十几个氨基酸还是合成吧，你做原核表达的话这个太小了很难区分和纯化的，不如直接合成的效果好。

谢谢
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4楼2015-05-27 10:18:50
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
风雪云: 金币+1 2015-05-27 23:50:28
只要载体宿主没有问题，优化表达条件，然后在原核蛋白表达中的成功率还是蛮高的，只是纯化时很难分离开，顶多用HPLC，一般你这个多肽用化学合成比较划算
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5楼2015-05-27 10:36:45
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
★
风雪云: 金币+1 2015-05-27 23:51:51
本帖内容被屏蔽
6楼2015-05-27 19:45:36
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风雪云

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-05-27 10:36:45
只要载体宿主没有问题，优化表达条件，然后在原核蛋白表达中的成功率还是蛮高的，只是纯化时很难分离开，顶多用HPLC，一般你这个多肽用化学合成比较划算...

这么短在原核中表达中能高吗？如果表达量很低不那就什么都纯化不出来吧
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7楼2015-05-27 23:51:25
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风雪云

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by mataomatao at 2015-05-27 19:45:36
最好连标签，之后切；这样的蛋白在神马宿主表达，这个需要筛选。。。。。。木有人能预测

能表达出来吗
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8楼2015-05-27 23:51:46
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 风雪云 at 2015-05-27 23:51:25
这么短在原核中表达中能高吗？如果表达量很低不那就什么都纯化不出来吧...

这个要看实际情况了，以前我老师做过这么小的，的确表达量很低，不好纯化。不过用HPLC多少还能纯化出来（当然纯度就完了），所以他后来改用的化学合成。。。
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15楼2015-05-28 09:04:57
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
16楼2015-05-28 10:37:20
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dmbb9楼
2015-05-27 23:57   回复  
风雪云(金币+1): 谢谢参与
jixiangbao10楼
2015-05-28 00:10   回复  
风雪云(金币+1): 谢谢参与
Jameskelly11楼
2015-05-28 00:13   回复  
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mtw92212楼
2015-05-28 00:14   回复  
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syhorchid13楼
2015-05-28 00:19   回复  
风雪云(金币+1): 谢谢参与
gorgan14楼
2015-05-28 05:15   回复  
风雪云(金币+1): 谢谢参与
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