应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » Red敲除！求含sacB质粒和卡那抗性质粒
141/2返回列表12下一页
查看: 3260  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

日光海

铜虫 (小有名气)

[求助] Red敲除！求含sacB质粒和卡那抗性质粒 已有2人参与

如题，最近小弟做Red敲除，用上海大学一教授赠与的pEX18Ap扩sacB-bla打靶片段却怎么也P不出来，已经做了两个月了还是木有结果。结果用质粒转化DH5α后在15%蔗糖LB上都长出来了。。。怀疑质粒可能送错了。
所以想自己用overlap PCR将sacB和卡那霉素抗性片段连接到一起。但缺少sacB质粒。求含sacB的pEX18Tc、pEX18Gm、pEX18Ap或pCVD442中的任何一种，若有卡那抗性的质粒一并求助吧。目前实验室自己只有pRKaraRed和一些pMD18T等常规质粒，如需要可交换互助。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
周老湿
1楼 2015-05-26 15:35:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小cool

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
日光海: 金币+40, ★★★★★最佳答案 2015-05-29 12:37:53
你好，我有这样的质粒，不能赠予，但可以交换，请联系q 2755157061
赞一下 回复此楼
2楼2015-05-26 16:32:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

流水不争

铁杆木虫 (正式写手)

小木虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
日光海: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-05-29 12:38:07
可以直接从168中 扩增sacB基因呀
赞一下 回复此楼
3楼2015-05-28 21:40:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

日光海

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 流水不争 at 2015-05-28 21:40:27
可以直接从168中 扩增sacB基因呀

我们实验室没有枯草168.而且枯草方向没什么研究。所以老板不会去买。我们实验室的枯草都是自己分离保存的。不过最近在武汉淼灵生物那找到了pK18mobSacB质粒。这个不错。
赞一下 回复此楼
周老湿
4楼2015-05-29 12:39:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

日光海

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小cool at 2015-05-26 16:32:03
你好，我有这样的质粒，不能赠予，但可以交换，请联系q 2755157061

已经向你们公司购买了。发现你们公司质粒还是蛮多的，常用的和一些很少见的质粒都很齐全，而且很便宜。不过，最关键的还是要看是否能出结果啊。要是用你们质粒真做成功了倒是最好。
赞一下 回复此楼
周老湿
5楼2015-05-29 12:42:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小cool

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 日光海 at 2015-05-29 12:42:33
已经向你们公司购买了。发现你们公司质粒还是蛮多的，常用的和一些很少见的质粒都很齐全，而且很便宜。不过，最关键的还是要看是否能出结果啊。要是用你们质粒真做成功了倒是最好。...

嗯嗯，好的，这个质粒我们测序鉴定和酶切鉴定，保证没问题的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

tian150685
6楼2015-05-29 20:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

流水不争

铁杆木虫 (正式写手)

小木虫
引用回帖:
4楼: Originally posted by 日光海 at 2015-05-29 12:39:53
我们实验室没有枯草168.而且枯草方向没什么研究。所以老板不会去买。我们实验室的枯草都是自己分离保存的。不过最近在武汉淼灵生物那找到了pK18mobSacB质粒。这个不错。...

这家公司的质粒好用吗？还用你用Red敲除是怎么做的呀？传授下经验  第一次同源重组同源臂多长
赞一下 回复此楼
7楼2015-05-30 08:42:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

日光海

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 流水不争 at 2015-05-30 08:42:19
这家公司的质粒好用吗？还用你用Red敲除是怎么做的呀？传授下经验  第一次同源重组同源臂多长...

他质粒还没到。到了用过后我再确定回复给你吧。Red敲除有很多综述性文章，已经是个很成熟的敲除体系了，你可以看看。具体的怎么做因实验而异的，目前我还没做完，仍在探索中，一些细节可以共同探讨。我采用上下游同源臂各90bp左右，用overlap PCR将两同源臂与打靶片段连接起来。虽然Red敲除同源臂50bp左右就可以成功，但长片段同源臂无疑是降低假阳性更好的方法。
赞一下 回复此楼
周老湿
8楼2015-06-01 08:35:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

流水不争

铁杆木虫 (正式写手)

小木虫
引用回帖:
8楼: Originally posted by 日光海 at 2015-06-01 08:35:31
他质粒还没到。到了用过后我再确定回复给你吧。Red敲除有很多综述性文章，已经是个很成熟的敲除体系了，你可以看看。具体的怎么做因实验而异的，目前我还没做完，仍在探索中，一些细节可以共同探讨。我采用上下游同 ...

好的 我先也在做这个 敲除框导入不成功 都是假阳性 我们一块做 以后多多交流 嘿嘿
赞一下 回复此楼
9楼2015-06-01 22:34:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ring02

新虫 (初入文坛)
你好，最近准备用Red做敲除，不知道能不能馈赠一些pRKaraRed质粒，我购买也行。谢谢！
赞一下 回复此楼
10楼2015-12-16 12:20:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 日光海 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 这年头没有找到涵评专家，还有中面上的可能吗 +9 dd921ww 2026-05-12 10/500 2026-05-15 10:41 by muyiliuhui
[基金申请] 精华III:  评审感受-评审感受-评审感受 +13 ferrarichen 2026-05-11 17/850 2026-05-15 10:16 by Kamiu_MK
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 l7k6xnh0yc 2026-05-14 3/150 2026-05-15 09:23 by onwj4wpxp2
[基金申请] 青C资助名额大幅增加！ +10 西葫芦炒鸡蛋 2026-05-13 14/700 2026-05-15 09:07 by gy116024
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cjf4bx70cj 2026-05-14 4/200 2026-05-15 09:03 by gagyerk94e
[文学芳草园] 风把牡丹吹跑了 +4 myrtle 2026-05-12 7/350 2026-05-14 23:58 by myrtle
[教师之家] 教学课件你会给同学吗 +8 硕士研究生吗 2026-05-13 8/400 2026-05-14 22:23 by 常规沥青
[考博] 26应届毕业生考博求助 +3 wo一定上岸 2026-05-13 3/150 2026-05-14 21:47 by 明海天涯
[基金申请] 重磅！青年科学基金项目（C类）资助增幅预计超过50% +5 水和泥不是水泥 2026-05-13 7/350 2026-05-14 20:57 by 水和泥不是水泥
[有机交流] 求助2，4-二氯-5-嘧啶甲醛的合成方法 20+3 光吃不拉 2026-05-14 5/250 2026-05-14 20:15 by 一切都是空工
[高分子] 本人最近太闲了，谁有问题可以提，每天会统一回复 +8 一切都是空工 2026-05-12 19/950 2026-05-14 20:03 by 一切都是空工
[考博] 申博自荐 +4 食品的橙子 2026-05-09 6/300 2026-05-14 16:05 by great1919
[考博] 材料类只有一篇综述能申博么 +4 乐逍遥谷 2026-05-13 4/200 2026-05-14 12:05 by zhyzzh
[基金申请] 请问大佬b0816评完了吗 +3 市民华南虎 2026-05-12 7/350 2026-05-14 07:41 by 市民华南虎
[论文投稿] 有带发论文的吗 +3 山楂之术 2026-05-09 3/150 2026-05-13 17:56 by Cyhcl2629
[硕博家园] 导师各种操作恶心咋办 +11 苍白的小青天 2026-05-09 13/650 2026-05-13 17:11 by 六两废铜
[论文投稿] 求助大佬sci投稿哪个好中 +3 江沅188 2026-05-12 4/200 2026-05-13 14:35 by 江沅188
[考博] 西南大学考核制博士 +3 lijunjie84 2026-05-11 6/300 2026-05-12 18:09 by lijunjie84
[文学芳草园] 窗边初夏的小雨 +7 阿美_Lml888 2026-05-09 10/500 2026-05-12 15:27 by 阿美_Lml888
[考博] 现在不知道怎么办，感觉很痛苦 +4 qweww 2026-05-11 5/250 2026-05-11 20:23 by Oversize
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭