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日光海

铜虫 (小有名气)

[求助] Red敲除!求含sacB质粒和卡那抗性质粒 已有2人参与

如题,最近小弟做Red敲除,用上海大学一教授赠与的pEX18Ap扩sacB-bla打靶片段却怎么也P不出来,已经做了两个月了还是木有结果。结果用质粒转化DH5α后在15%蔗糖LB上都长出来了。。。怀疑质粒可能送错了。
所以想自己用overlap PCR将sacB和卡那霉素抗性片段连接到一起。但缺少sacB质粒。求含sacB的pEX18Tc、pEX18Gm、pEX18Ap或pCVD442中的任何一种,若有卡那抗性的质粒一并求助吧。目前实验室自己只有pRKaraRed和一些pMD18T等常规质粒,如需要可交换互助。
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周老湿
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流水不争

铁杆木虫 (正式写手)

小木虫

引用回帖:
8楼: Originally posted by 日光海 at 2015-06-01 08:35:31
他质粒还没到。到了用过后我再确定回复给你吧。Red敲除有很多综述性文章,已经是个很成熟的敲除体系了,你可以看看。具体的怎么做因实验而异的,目前我还没做完,仍在探索中,一些细节可以共同探讨。我采用上下游同 ...

好的 我先也在做这个 敲除框导入不成功 都是假阳性 我们一块做 以后多多交流 嘿嘿
9楼2015-06-01 22:34:33
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小小cool

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
日光海: 金币+40, ★★★★★最佳答案 2015-05-29 12:37:53
你好,我有这样的质粒,不能赠予,但可以交换,请联系q 2755157061
2楼2015-05-26 16:32:03
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流水不争

铁杆木虫 (正式写手)

小木虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
日光海: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-05-29 12:38:07
可以直接从168中 扩增sacB基因呀
3楼2015-05-28 21:40:27
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日光海

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 流水不争 at 2015-05-28 21:40:27
可以直接从168中 扩增sacB基因呀

我们实验室没有枯草168.而且枯草方向没什么研究。所以老板不会去买。我们实验室的枯草都是自己分离保存的。不过最近在武汉淼灵生物那找到了pK18mobSacB质粒。这个不错。
周老湿
4楼2015-05-29 12:39:53
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