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18766124921

金虫 (小有名气)

[求助] 安捷伦制备液相关于洗脱梯度 已有9人参与

时间/min   速率(4ml/min)  乙腈  甲醇
0                 4                         50     50
2.5              4                          90     10              
8                 4                        90      10
由于是工业样品,不知道是什么东西。求色谱大神给详细分析一下,怎么设置洗脱梯度,,thank you

安捷伦制备液相关于洗脱梯度
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逆境中生存,生活更美妙
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
等度,100%甲醇试试
13楼2015-05-25 17:06:39
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18766124921

金虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by e_liang369 at 2015-05-25 17:27:23
出峰太早,进样量太大

500ul?还算大吗
逆境中生存,生活更美妙
15楼2015-05-25 18:16:49
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xuchao7447

木虫 (著名写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by TMEDA at 2015-05-25 19:23:46
一般10或20uL...

他这个事制备液相,不是分析型的
生活就是如此
21楼2015-05-26 08:14:27
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mao877516786

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by songbingna at 2015-05-25 19:02:43
都是有机相可以啊,我做过50甲醇,50乙醇的
...

你可以先用我说的方法试试。。。。
22楼2015-05-26 10:06:52
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chenxj9995

金虫 (小有名气)

引用回帖:
26楼: Originally posted by 18766124921 at 2015-05-26 17:46:05
用水和甲醇会不会好一点...

甲醇极性6.6,水的极性十点多,可以的
2014我来了!!!
27楼2015-05-27 09:05:00
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mao877516786

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
28楼: Originally posted by 18766124921 at 2015-05-27 10:21:35
我的是C18的柱子,应该是反相的,你说可以先用快梯度做一针比如5%-65%--20min(有机相的含量)。意思是从0-20min,有机相浓度一直改变吗...

对,首先确认是反相柱,至于我说的快梯度,你也可以在宽泛一点,进样量少一点,这样可以确认出峰时乙腈浓度,然后再用细的梯度制备就可以了。TFA是三氟乙酸,如果对你的样品没影响可以加0.1%在流动相里。有什么问题可以继续交流,我做了很长时间的反相制备。
33楼2015-05-27 12:18:47
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普通回帖

archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

是反相吗?怎么没有水?
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
2楼2015-05-24 17:30:37
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殇丶彼岸

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
把乙腈换成水试试

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-05-24 18:25:05
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cpuclz

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
把流动相换成水和乙腈。如果样品对酸稳定,水和乙腈里分别加0.1%的三氟乙酸。
用的柱子是什么填料的,什么尺寸的?
先做个hplc,看看出峰情况,再确定制备梯度。
4楼2015-05-24 20:07:16
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18766124921

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by archbishop at 2015-05-24 17:30:37
是反相吗?怎么没有水?

哪个管仪器的老师说不能跑水相
逆境中生存,生活更美妙
5楼2015-05-25 10:42:26
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xuchao7447

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这基本没什么保留吗,吧乙腈或者甲醇换成水相,什么奇葩的柱子,竟然不能用水相,那还做个毛的HPLC啊
生活就是如此
6楼2015-05-25 11:18:09
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xuchao7447

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 18766124921 at 2015-05-25 10:42:26
哪个管仪器的老师说不能跑水相...

他是说的不能跑纯水相吧
生活就是如此
7楼2015-05-25 11:18:46
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mao877516786

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
archbishop: 金币+2, 感谢参与。 2015-05-25 16:29:03
感觉你没怎接触液相,两个流动相不能都是有机相,先弄清楚你用的是正相柱还是反相柱,假如用的是反相柱,则需要水相,流动相改成水和乙腈,切记不要用100%的水相冲洗色谱柱,如果你开始不知道怎么设梯度,可以先用快梯度做一针比如5%-65%--20min(有机相的含量),确定一下出峰浓度,然后再根据你的要求细化梯度。。。当然如果你的样品疏水性较强可以提高开始有机相的浓度,当然我说的这个出峰浓度的摸索也可以利用分析做,如果峰型不好看可以加0.1%的TFA
8楼2015-05-25 12:40:35
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18766124921

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by mao877516786 at 2015-05-25 12:40:35
感觉你没怎接触液相,两个流动相不能都是有机相,先弄清楚你用的是正相柱还是反相柱,假如用的是反相柱,则需要水相,流动相改成水和乙腈,切记不要用100%的水相冲洗色谱柱,如果你开始不知道怎么设梯度,可以先用快 ...

第一次搞这个!
逆境中生存,生活更美妙
9楼2015-05-25 13:49:19
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18766124921

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by xuchao7447 at 2015-05-25 11:18:46
他是说的不能跑纯水相吧...

那个管这个仪器的老师也不太熟悉这个仪器,我是第一次搞这个
逆境中生存,生活更美妙
10楼2015-05-25 13:51:01
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