应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体自连问题
51/1返回列表
查看: 4736  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

青苹果QT

金虫 (小有名气)

[求助] 载体自连问题 已有3人参与

如何避免载体自连？
双酶切，然后连接，但是有时候会自连
求好方法
谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-05-23 13:44:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
怀疑人生，不如怀疑假货！
双酶切自连率非常低，你检测下载体是否切干净咯。
如果无论怎么做都切不干净，坚决跟老师报告酶不行了，一定要坚决哦
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-05-23 16:06:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

erland21411

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般如果你双酶切之后跑胶只有一条带就可以认为质粒被切开了~
有的酶的酶切位点比较相似时就是容易载体自连，尤其是在使用T4这种连接效率低识别率低的连接酶的时候，我们实验室用Hind III和EcoR I双酶切的时候就特别容易发生载体自连。
可以考虑换酶切位点，或者换连接酶。
赞一下 回复此楼
3楼2015-05-23 22:24:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
载体自连一般都会发生，只是效率高低而已。如果两个酶切位点离得很近，就更容易发生切不干净的问题。我感觉最好的方法是从已经构建好的载体上切下来，然后再胶回收。这个对于我来说最好用。
赞一下 回复此楼
4楼2015-05-24 06:13:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫儿飞不飞

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by erland21411 at 2015-05-23 22:24:11
一般如果你双酶切之后跑胶只有一条带就可以认为质粒被切开了~
有的酶的酶切位点比较相似时就是容易载体自连，尤其是在使用T4这种连接效率低识别率低的连接酶的时候，我们实验室用Hind III和EcoR I双酶切的时候就特 ...

最近也遇到了使用HindIII和EcorI酶切的位点就特别多的自连，而用NdeI和KpnI切的位点连接就很正常，看到你的说法也证实了我的假设，正在换酶切位点；
赞一下 回复此楼
朝闻道，吃酸粥
5楼2020-11-21 15:39:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 青苹果QT 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭