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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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douglaspei

金虫 (正式写手)

[求助] WB实验有非特异结合 已有1人参与

今天做的WB实验,泳道里有很多非特异结合,请高手指教。

WB实验有非特异结合
C,27Q,28E,MS,29L,29T,33K,44E,MS,46T,46V,56S,61R,64P,72W-150516A.jpg


WB实验有非特异结合-1
C,27Q,28E,MS,29L,29T,33K,44E,MS,46T,46V,56S,61R,64P,72W-150516B.jpg
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zhsina123

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
douglaspei: 金币+1, 有帮助 2015-05-21 14:33:57
个人觉得可以考虑几个问题:
一抗孵育后,是否已经使用TBST充分洗脱?
一抗的特异性如何?是多抗还是单抗?
二抗杂交后是否洗脱充分?

看到膜上有许多泡泡,转膜时应该赶去泡泡,避免气泡阻碍蛋白转膜。
2楼2015-05-16 18:33:21
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douglaspei

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhsina123 at 2015-05-16 18:33:21
个人觉得可以考虑几个问题:
一抗孵育后,是否已经使用TBST充分洗脱?
一抗的特异性如何?是多抗还是单抗?
二抗杂交后是否洗脱充分?

看到膜上有许多泡泡,转膜时应该赶去泡泡,避免气泡阻碍蛋白转膜。

谢谢您的回复,
1. 我用的是金斯瑞的试剂盒,在一抗与目的蛋白结合前,先孵育一抗和二抗。
2. 一抗之前做过,特异性还不错。
3. 抗体孵育后洗的比较充分,只有两张膜叠在一块洗的,如果有影响也应该是下面那一张。
4. 试剂盒过期两周了,个人觉得是不是封闭液坏了,导致抗体与所有蛋白结合。
3楼2015-05-17 13:04:04
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douglaspei

金虫 (正式写手)

另外,在半干转的过程中,将电泳后的胶向膜上转移时,容易弄碎胶,且不易与膜对整,不知道没有没什么好的方法,谢谢!
4楼2015-05-17 13:13:49
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