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星乐之梦

新虫 (初入文坛)

[求助] 惊呆了,自杀质粒不自杀了 已有2人参与

之前一直在做基因中断的一些实验,采用的载体质粒为PDS3.0是一种自杀质粒,含有庆大抗性,在Nacl-less LB中摇床培养十几个小时会自动消除。但最近两个月不知怎么的,自杀质粒就是摇不掉,受体菌仍有庆大抗性而且P不出条带。请各位大神指教一二。谢谢!
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dongdong85

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 星乐之梦 at 2015-09-24 16:48:56
目前我已经不用这个中断系统了,不过还是建议你重新接菌抽取该质粒,培养条件严格按照要求来,时间可以长一些,祝你成功!...

谢谢你的回复,你觉得可能是质粒的原因是吧,因为你开始用是没有问题的,不知道最后你怎么解决自杀质粒不自杀了这个问题的。我现在碰到的问题是第一次重组克隆在蔗糖平板上能够生长,不知道是不是这个质粒在这个细菌不能用?
加油,努力
4楼2015-09-29 17:08:47
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dongdong85

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好,我是中国科学技术大学的学生,我用pre112(类似于pDS3.0)敲除基因,也碰到了你相同的问题,不知道你解决了没有,还请多多指教。打搅了。我的邮箱:dfl@mail.ustc.edu.cn
加油,努力
2楼2015-09-24 15:06:50
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星乐之梦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dongdong85 at 2015-09-24 15:06:50
你好,我是中国科学技术大学的学生,我用pre112(类似于pDS3.0)敲除基因,也碰到了你相同的问题,不知道你解决了没有,还请多多指教。打搅了。我的邮箱:dfl@mail.ustc.edu.cn

目前我已经不用这个中断系统了,不过还是建议你重新接菌抽取该质粒,培养条件严格按照要求来,时间可以长一些,祝你成功!
3楼2015-09-24 16:48:56
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星乐之梦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dongdong85 at 2015-09-29 17:08:47
谢谢你的回复,你觉得可能是质粒的原因是吧,因为你开始用是没有问题的,不知道最后你怎么解决自杀质粒不自杀了这个问题的。我现在碰到的问题是第一次重组克隆在蔗糖平板上能够生长,不知道是不是这个质粒在这个细 ...

这个质粒在大肠中能用这个没有问题,后期可能是某些因素导致其蔗糖的敏感性丧失,建议重新接菌抽质粒。
5楼2015-09-30 08:43:11
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