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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 惊呆了，自杀质粒不自杀了
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星乐之梦

新虫 (初入文坛)

[求助] 惊呆了，自杀质粒不自杀了 已有2人参与

之前一直在做基因中断的一些实验，采用的载体质粒为PDS3.0是一种自杀质粒，含有庆大抗性，在Nacl-less LB中摇床培养十几个小时会自动消除。但最近两个月不知怎么的，自杀质粒就是摇不掉，受体菌仍有庆大抗性而且P不出条带。请各位大神指教一二。谢谢！
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1楼 2015-05-14 21:27:07
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dongdong85

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 星乐之梦 at 2015-09-24 16:48:56
目前我已经不用这个中断系统了，不过还是建议你重新接菌抽取该质粒，培养条件严格按照要求来，时间可以长一些，祝你成功！...

谢谢你的回复，你觉得可能是质粒的原因是吧，因为你开始用是没有问题的，不知道最后你怎么解决自杀质粒不自杀了这个问题的。我现在碰到的问题是第一次重组克隆在蔗糖平板上能够生长，不知道是不是这个质粒在这个细菌不能用？
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加油，努力
4楼2015-09-29 17:08:47
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dongdong85

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好，我是中国科学技术大学的学生，我用pre112（类似于pDS3.0）敲除基因，也碰到了你相同的问题，不知道你解决了没有，还请多多指教。打搅了。我的邮箱：dfl@mail.ustc.edu.cn
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加油，努力
2楼2015-09-24 15:06:50
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星乐之梦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dongdong85 at 2015-09-24 15:06:50
你好，我是中国科学技术大学的学生，我用pre112（类似于pDS3.0）敲除基因，也碰到了你相同的问题，不知道你解决了没有，还请多多指教。打搅了。我的邮箱：dfl@mail.ustc.edu.cn

目前我已经不用这个中断系统了，不过还是建议你重新接菌抽取该质粒，培养条件严格按照要求来，时间可以长一些，祝你成功！
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3楼2015-09-24 16:48:56
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星乐之梦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dongdong85 at 2015-09-29 17:08:47
谢谢你的回复，你觉得可能是质粒的原因是吧，因为你开始用是没有问题的，不知道最后你怎么解决自杀质粒不自杀了这个问题的。我现在碰到的问题是第一次重组克隆在蔗糖平板上能够生长，不知道是不是这个质粒在这个细 ...

这个质粒在大肠中能用这个没有问题，后期可能是某些因素导致其蔗糖的敏感性丧失，建议重新接菌抽质粒。
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5楼2015-09-30 08:43:11
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