应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SSR预实验荧光带不上
61/1返回列表
查看: 831  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xynlwt

新虫 (初入文坛)

[求助] SSR预实验荧光带不上 已有2人参与

如题，SSR的预实验已经做了很久，荧光基团总是加不到目的片段上，而是加在二聚体或者其他杂带上，20ul和10ul体系都能P出来，用的酶是天根的TAQ MIX，引物部分试过三种都失败了，其他水和DNA的比例问题不大。1），F引物：M13F引物：修饰基团：R引物=2：3：5：10。2），F引物：M13F引物：修饰基团：R引物=0.5:0.5:9:10。这种荧光加在目的片段上一点点，峰极低，几乎看不见。3），用了两轮，第一轮，M13F引物：R=1:1。第一轮产物用作第二轮模板，第二轮引物比例为，修饰基团：R引物=1:1。峰还是很低，要么就是依然加在比较短的杂带上。最后想看看正常情况到底应该什么样，就合了一条直接把修饰基团加在F引物上的引物，这次确实加到了目的片段上，但是这种方法太贵了，预实验的话会远超预算，只有预实验先做好了正式实验再用，所以请大神们帮我看看怎样能把这个预实验部分做出来，谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-05-11 10:30:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xynlwt

新虫 (初入文坛)
顶一下，给大神们看一看~
赞一下 回复此楼
2楼2015-05-11 15:05:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yingheqian

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-05-12 08:03:47
xynlwt: 金币+1, ★有帮助 2015-05-12 14:17:31
这个效果肯定没有直接标记在引物上好，我们试过引物合成的时候合成长一点的引物，也就是一端（F或R)的引物在其5‘端加上M13引物，第一次PCR就用这个扩增，然后以扩增产物为模板，用荧光标记的M13引物和另一端没有标记的（R或F）引物，再扩增一次。效果还行。
赞一下 回复此楼
3楼2015-05-11 20:16:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吾小豆123

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-05-12 08:03:52
xynlwt: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-05-12 14:17:17
有篇文献是专门讲这个技术的。An economic method for the fluorescent labeling
of PCR fragments   可以适当调整引物的浓度。
赞一下 回复此楼
4楼2015-05-11 21:43:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xynlwt

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 吾小豆123 at 2015-05-11 21:43:21
有篇文献是专门讲这个技术的。An economic method for the fluorescent labeling
of PCR fragments   可以适当调整引物的浓度。

多谢我去看看哈~
赞一下 回复此楼
5楼2015-05-12 14:13:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xynlwt

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yingheqian at 2015-05-11 20:16:12
这个效果肯定没有直接标记在引物上好，我们试过引物合成的时候合成长一点的引物，也就是一端（F或R)的引物在其5‘端加上M13引物，第一次PCR就用这个扩增，然后以扩增产物为模板，用荧光标记的M13引物和另一端没有标 ...

感谢您的回复~
回复此楼
6楼2015-05-12 14:16:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xynlwt 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0857调剂 +4 一ll半 2026-02-28 5/250 2026-03-02 02:33 by 908055542
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 材料复试调剂 +3 学材料的点 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:07 by ccp273206157
[基金申请] 本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 0856求调剂285 +10 吕仔龙 2026-02-28 10/500 2026-03-01 21:37 by 公瑾逍遥
[考研] 0805总分292，求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭