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SSR预实验荧光带不上已有2人参与
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| 如题,SSR的预实验已经做了很久,荧光基团总是加不到目的片段上,而是加在二聚体或者其他杂带上,20ul和10ul体系都能P出来,用的酶是天根的TAQ MIX,引物部分试过三种都失败了,其他水和DNA的比例问题不大。1),F引物:M13F引物:修饰基团:R引物=2:3:5:10。2),F引物:M13F引物:修饰基团:R引物=0.5:0.5:9:10。这种荧光加在目的片段上一点点,峰极低,几乎看不见。3),用了两轮,第一轮,M13F引物:R=1:1。第一轮产物用作第二轮模板,第二轮引物比例为,修饰基团:R引物=1:1。峰还是很低,要么就是依然加在比较短的杂带上。最后想看看正常情况到底应该什么样,就合了一条直接把修饰基团加在F引物上的引物,这次确实加到了目的片段上,但是这种方法太贵了,预实验的话会远超预算,只有预实验先做好了正式实验再用,所以请大神们帮我看看怎样能把这个预实验部分做出来,谢了! |
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